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文档介绍
【生物】2020届一轮复习人教版从生物材料中提取某些特定成分及DNA的粗提取和鉴定学案
2020届 一轮复习 人教版 从生物材料中提取某些特定成分及DNA的粗提取和鉴定 学案 1.从生物材料中提取某些特定的成分。 2.DNA的粗提取与鉴定。 考点一 从生物材料中提取某些特定的成分 1.玫瑰精油的提取 2.橘皮精油的提取 3.胡萝卜素的提取 [归纳整合] 1.植物有效成分的提取的三种常用方法比较 提取方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 萃取法 实验 原理 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来 通过机械加压,压榨出果皮中的芳香油 使芳香油溶解在有机溶剂中,蒸发溶剂获得芳香油 方法 步骤 ①水蒸气蒸馏 ②分离油层 ③除水过滤 ①石灰水浸泡、漂洗 ②压榨、过滤、静置 ③再次过滤 ①粉碎、干燥 ②萃取、过滤 ③浓缩 适用 范围 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取 适用范围广,要求原料的颗粒要尽可能细小,能充分浸泡在有机溶剂中 优点 简单易行,便于分离 生产成本低,易保持原料原有的结构和功能 出油率高,易分离 局限 性 水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题 分离较为困难,出油率相对较低 使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量 2.胡萝卜素粗品鉴定过程中的5个关键点 (1)层析时没有选择干净的滤纸,导致实验现象不明显。为了防止操作时对滤纸的污染,应尽量避免用手直接接触滤纸,可以戴手套进行操作。 (2)点样时点样圆点太大(直径大于2 mm)会导致最终在滤纸上形成一条线,无法辨认被提取的色素。点样圆点的直径应为2 mm。 (3)将点好样的滤纸卷成圆筒状,卷纸时不能将滤纸两边相互接触,以避免由于毛细现象导致溶剂沿滤纸两边的移动加快,溶剂前沿不齐,影响结果。 (4)层析液没及样品原点,色素溶解于层析液中,造成实验失败。层析液不可没及样品原点,以免色素溶解于层析液中,使鉴定失败。 (5)没有设置标准样品作对照。层析液中是否提取到胡萝卜素,可通过与标准样品中的β-胡萝卜素作对比予以确认。 [思维探究] 下图是提取植物有效成分的水蒸气蒸馏装置,据图分析: (1)图中a、b哪一个是进水口,哪一个为出水口?加热时为何常向液体中加入几片碎石或瓷片? 提示:图中a为出水口,b为进水口,这与蒸气流方向相反;加热时向液体中加入几片碎石或瓷片的目的是防止液体暴沸。 (2)玫瑰精油为什么适合用水中蒸馏法进行提取? 提示:因为玫瑰精油的化学性质稳定,难溶于水,易溶于有机溶剂,能随水蒸气一同蒸馏,且不会导致原料焦糊和有效成分水解等,所以适合用水中蒸馏法进行提取。 (3)为何常采用水浴加热?在烧瓶口安装冷凝回流装置的目的是什么? 提示:采用水浴加热的原因:有机溶剂都是易燃物,直接使用明火加热容易引起燃烧、爆炸。在烧瓶口安装冷凝回流装置的目的是防止加热时有机溶剂挥发。 [教材深挖] 教材选修1P78“萃取剂选择讨论” 1.乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取吗?为什么? 提示:胡萝卜素可溶于乙醇和丙酮,但它们是水溶性有机溶剂,因萃取中能与水混溶而影响萃取效果,所以不用它们作萃取剂。 2.在石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳这几种有机溶剂中,哪种最适宜用来提取胡萝卜素? 提示:在这五种有机溶剂中,石油醚的沸点最高,在加热萃取时不易挥发,所以石油醚最适宜用作萃取剂。 命题点一 植物芳香油的提取 1.(2019·四川乐山一模)近几年我国柑橘大丰收,提取橘皮精油是提高其经济价值的重要途径。请分析回答提取过程的有关问题: (1)提取橘皮精油,常采用______________法而不用水蒸气蒸馏法,原因是________________________________________。 (2)提取橘皮精油时,为了提高出油率,首先将橘皮_________________,并用石灰水浸泡,石灰水的作用是________________________________________。 (3)压榨过程中,为了使橘皮精油易与水分离,常加___________________________ ________________________________________。 (4)得到压榨液后,过滤除去固体物和残渣,然后_________________进一步除去质量较小的残留固体物,再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮精油分离出来。此时,橘皮精油中含有少量的水和果蜡,需_________________使杂质沉淀,用吸管吸出上层澄清橘皮精油,其余部分过滤,_____________________合并后成为最终的橘皮精油。 解析 (1)橘皮精油主要存在于橘皮中,由于橘皮精油的有效成分在水蒸气蒸馏过程中会发生部分水解,同时水中蒸馏会导致原料焦糊问题,因此一般采用压榨法提取橘皮精油。(2)提取橘皮精油时,为了提高出油率,首先将橘皮干燥去水,然后用石灰水浸泡,石灰水的作用是:破坏细胞结构,分解果胶,防止橘皮压榨时滑脱,提高出油率。 (3)压榨过程中常加入相当于橘皮质量0.25%的NaHCO3和5%的Na2SO4 ,并将pH调至7~8,其作用是促进橘皮精油与水的分离。(4)得到压榨液后,用布袋过滤除去固体物和残渣,对滤液进行离心进一步除去较小的残留固体物,再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮精油分离出来,然后在5~10 ℃下静置5~7天,使果蜡等杂质沉淀,用吸管吸出上层澄清橘皮油,其余部分过滤,滤液与吸出的上层橘油合并后成为最终的橘皮精油。 答案 (1)压榨 水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题 (2)干燥去水 破坏细胞结构,分解果胶,防止橘皮压榨时滑脱,提高出油率 (3)相当于橘皮质量0.25%的NaHCO3和5%的Na2SO4 (4)离心 在5~10 ℃下静置5~7天 滤液与吸出的上层橘油 2.(2019·湖北孝感市一模)玫瑰精油在玫瑰花瓣中含量最高,工业上常以玫瑰花瓣为原料,采用水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油。回答下列问题: (1)采用水蒸气蒸馏时,水蒸气能将玫瑰精油从花瓣中携带出来,是因为玫瑰精油具有___________的特点。 (2)水蒸气蒸馏后,能收集到乳白色的油水混合物。向油水混合物中加入____________,就会出现明显的油层与水层。分离出油层,一般可加入一些____________,以吸收油层中的水分。 (3)蒸馏时,会存在许多因素影响攻瑰精油的产量。下图是当玫瑰花瓣与清水的质量比为1∶4时,出油率与蒸馏时间的变化关系,一般蒸馏时间最好控制在____________h。 (4)植物芳香油的提取方法有多种,具体采用哪种方法,要根据植物原料的特点来决定。提取玫瑰精油______(填“可以”或“不可以”)采用有机溶剂萃取法,理由是_________________。 解析 由图可知,在一定范围内,玫瑰精油的出油率与蒸馏时间呈正相关,蒸馏时间大约为4h时,出油率最高。可据此答题。 (1)玫瑰精油化学性质稳定,难溶于水,易溶于有机溶剂,挥发性强,能随水蒸气一同蒸馏。 (2)在提取过程中加入NaCl,可以增加水的比重,使油水分层;分离出油层后,一般可加入一些无水Na2SO4,以吸收油层中的水分。 (3)根据出油率与蒸馏时间的变化关系曲线图可知,一般蒸馏4小时,出油率最大,再延长时间,出油率不变,因此蒸馏时间最好控制在4h。 (4)由于玫瑰精油易溶于有机溶剂,所以提取玫瑰精油可以采用有机溶剂萃取法。 答案 (1)挥发性强 (2)NaCl 无水Na2SO4 (3)4 (4)可以 玫瑰精油易溶于有机溶剂 命题点二 胡萝卜素的提取 3.(2019·广东江门一模)根据从胡萝卜中提取胡萝卜素的相关知识及胡萝卜素的性质,回答下列问题: (1)从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是________法。用这种方法提取胡萝卜素的主要步骤是:粉碎、干燥、________、________、________。 (2)在胡萝卜颗粒的加热干燥过程中,应严格将________和________控制在一定范围内,原因是_____________________________________________。 (3)一般情况下,提取胡萝卜素时,萃取效率与原料颗粒的含水量成________比。 解析 (1)从胡萝卜中提取胡萝卜素的常用方法是萃取法,用这种方法提取胡萝卜素的主要步骤是:粉碎、干燥、萃取、过滤、浓缩。(2)在胡萝卜颗粒的加热干燥过程中应该严格控制时间和温度,时间过长或温度过高容易造成胡萝卜素分解。(3)提取胡萝卜素时,原料颗粒越小、水分越少,萃取温度适度高,萃取效果较好,因此与原料颗粒的含水量成反比。 答案 (1)萃取 萃取 过滤 浓缩 (2)温度 时间 温度过高和时间过长会导致胡萝卜素分解 (3)反 考点二 DNA的粗提取与鉴定 1.实验原理 2.实验流程 — ↓ — ↓ — ↓ — ↓ — [归纳整合] 利用数字归纳DNA的粗提取与鉴定 (1)加蒸馏水2次: ①加到鸡血细胞液中,使血细胞吸水涨破; ②加到含DNA的2 mol/L的NaCl溶液中,使NaCl溶液的浓度下降到0.14 mol/L,使DNA析出。 (2)用纱布过滤3次: ①过滤鸡血细胞破裂液,得到含细胞核物质的滤液; ②滤取0.14 mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物); ③过滤溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液。 (3)用NaCl溶液4次: ①加2 mol/L的NaCl溶液,溶解提取的细胞核物质; ②用0.14 mol/L的NaCl溶液使DNA析出; ③用2 mol/L的NaCl溶液,溶解滤取的DNA黏稠物; ④用2 mol/L的NaCl溶液,溶解丝状物用于鉴定DNA。 [思维探究] 下面为“DNA的粗提取与鉴定”实验的一些重要操作示意图,据图回答下列有关该实验的问题: (1)用箭头和字母表示出正确的操作顺序。 提示:C→B→E→D→A。 (2)上图C、E步骤都加入蒸馏水,但其目的不同,那么分别是什么? 提示:C的目的是加速鸡血细胞的破裂;E的目的是降低NaCl溶液的浓度,使DNA析出。 (3)图A步骤中所用酒精必须经充分冷却才能使用,该步骤的目的是什么? 提示:提取含杂质少的DNA。 (4)为鉴定A中所得到的丝状物的主要成分为DNA,说出鉴定方法,并预测结果和结论。 提示:可滴加二苯胺试剂并沸水浴。如果出现蓝色,则该丝状物的主要成分为DNA。 [教材深挖] 1.教材选修1P55“旁栏思考题”:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂? 提示:蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),从而释放出DNA。 2.教材选修1P55“旁栏思考题”:加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么? 提示:洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。 命题点一 DNA的粗提取 1. 如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。分析回答: (1)图中实验材料A可以是____________等,研磨前加入的B应该是____________。 (2)通过上述所示步骤得到滤液C后,再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是__________________,再过滤得到滤液D,向滤液D中加入蒸馏水的目的是___________________________。 (3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中,将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2 mL的4种溶液中,经搅拌后过滤,获得如表所示的4种滤液,含DNA最少的是滤液______。 1 B液中 搅拌、研磨后过滤 滤液E 2 2 mol/L的NaCl溶液中 搅拌后过滤 滤液F 3 0.14 mol/L的NaCl溶液中 搅拌后过滤 滤液G 4 冷却的95%的酒精溶液中 搅拌后过滤 滤液H 解析 (1)用洋葱、菜花等破碎细胞时,加入一定量的洗涤剂和食盐,洗涤剂可以溶解细胞膜,有利于DNA的释放,食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。 (2)在含有DNA的滤液中,加入2 mol/L的NaCl溶液,可以使DNA溶解而杂质析出;在滤液D中加入蒸馏水,当NaCl溶液浓度为0.14 mol/L时,DNA溶解度最小而析出,除去可溶性杂质。 (3)在滤液E中,只是除去了部分杂质,则含DNA较多;在滤液F中,除去了较多的蛋白质等,则含DNA最多;在滤液G中,因DNA析出,则含DNA较少;在滤液H中,因DNA不溶于体积分数为95%的冷酒精溶液,则含DNA最少。 答案 (1)洋葱(菜花) 洗涤剂和食盐 (2)使DNA溶解 使DNA(溶解度下降而沉淀)析出,除去可溶性杂质 (3)H 命题点二 DNA的鉴定 2.“DNA的粗提取与鉴定”实验中,A、B、C、D、E五个小组除表中所列处理方法不同外,其他操作步骤均相同且正确,但实验结果却不同。分析回答: 组 别 实验 材料 提取核物质时 加入的溶液 去除杂质时 加入的溶液 DNA鉴定时 加入的试剂 A 鸡血 蒸馏水 体积分数为95% 的酒精(25℃) 二苯胺 B 菜花 蒸馏水 体积分数为95% 的酒精(冷却) 双缩脲 C 人血浆 蒸馏水 体积分数为95% 的酒精(冷却) 二苯胺 D 人血 细胞 2 mol/L 的氯化钠 0.14 mol/L的 氯化钠 双缩脲 E 鸡血 蒸馏水 体积分数为95% 的酒精(冷却) 二苯胺 (1)实验材料选择错误的组别是________,其原因是_______________________________ ___________________________________________________________。 (2)实验步骤(不包括实验材料)均正确,但得不到DNA的组别是________。 (3)沸水浴中试管颜色变蓝的组别是________;蓝色较淡的是________,其原因是________________________________________。 (4)B组实验不成功的最主要原因是_______________________________。 解析 (1)人的血浆中没有细胞结构,人成熟的红细胞没有细胞核,在这些材料中不能得到DNA或得到的DNA很少。 (2)血细胞中有少量的白细胞,其中有DNA,所以只有C组人血浆中没有DNA。 (3)冷却的酒精溶液中DNA的溶解度最低,而A组中为25 ℃的酒精溶液。 (4)菜花细胞外有细胞壁起保护作用,在蒸馏水中不会破裂,所以不能得到DNA。 答案 (1)C、D 人的血浆中没有细胞结构,人成熟的红细胞中没有细胞核,选用这些材料得不到DNA或得到的DNA很少 (2)C (3)A、E A 冷却的酒精溶液中DNA的溶解度最低,而该组使用的是25 ℃ 的酒精溶液 (4)菜花细胞在蒸馏水中不能被破坏,得不到DNA(应采用研磨的方法) ◎ 1.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料(√) 2.DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水(√) 3.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌,可见玻棒上有白色絮状物(×) 4.提炼玫瑰精油的玫瑰花应在花开的初期采收,因为此阶段的花含玫瑰精油最高(×) 5.用柑橘和柠檬作为材料不适合用水中蒸馏的方法进行提取(√) 6.油水混合物中加入无水硫酸钠,有利于分离油层(×) 7.蒸馏法的实验原理是利用水将芳香油溶解出来,再把水蒸发掉,剩余的就是芳香油(×) 8.萃取是利用了芳香油易溶于有机溶剂的特性进行提取的一种方法(√) 9.由于胡萝卜素易溶于石油醚等有机溶剂中,所以可以采用萃取的方法进行提取(√) 10.乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取(×) 11.萃取的效率主要取决于萃取的温度和时间(×) 12.新鲜的胡萝卜含水量高,干燥时可采用高温以节省时间(×) ◎ 1.植物芳香油提取成功的关键点 (1)水蒸气蒸馏要适当延长蒸馏时间,温度不能太高。 (2)用于萃取的有机溶剂必须事先精制,除去杂质。 (3)压榨时原料必须要浸透,这样压榨时不会滑脱,出油率高,不堵塞筛眼;使用石灰水充分浸泡原料的目的是破坏细胞结构,分解果胶,防止橘皮压榨时滑脱,提高出油率。 2.选择萃取胡萝卜素的有机溶剂的原则 (1)具有较高的沸点,能够充分溶解胡萝卜素,并且不与水混溶 (2)萃取效率要高。 (3)对人无毒性、不易燃、易与产品分离、不影响产品质量 3.DNA粗提取与鉴定的2个易错点 (1)洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。 (2)用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 1.(2017·全国卷Ⅲ,T37)绿色植物甲含有物质W,该物质为无色针状晶体,易溶于极性有机溶剂,难溶于水,且受热、受潮易分解。其提取流程为:植物甲→粉碎→加溶剂→振荡→收集提取液→活性炭处理→过滤去除活性炭→蒸馏(含回收溶剂)→重结晶→成品。回答下列问题: (1)在提取物质W时,最好应选用的一种原料是________(填“高温烘干”“晾干”或“新鲜”)的植物甲,不宜选用其他两种的原因是______________________________。 (2)提取物质W时,振荡的作用是___________________________。 (3)活性炭具有很强的吸附能力,在提取过程中,用活性炭处理提取液的目的是________________________________________。 (4)现有丙酮(沸点56℃)、乙醇(沸点约78℃)两种溶剂,在提取物质W时,应选用丙酮作为提取剂,理由是________________________________________。 (5)该实验操作过程中应注意的事项是_________________________(答出两点即可)。 解析 (1)高温烘干过程中,植物甲中的物质W易被破坏;新鲜的植物甲含水量高,用于提取的极性有机溶剂会被水稀释,进而降低对物质W的提取效果,因此,原料应选用晾干的植物甲。 (2)提取物质W时,振荡的作用是使粉碎的颗粒与有机溶剂充分混匀,从而使物质W充分溶解于极性有机溶剂中。 (3)绿色植物甲中含有色素,色素也能溶于有机溶剂,用活性炭处理提取液的目的是去除提取液中的色素,以增加成品的纯度。 (4)与乙醇相比,丙酮的沸点较低,而物质W受热易分解,故应选用丙酮作为提取剂,蒸馏时物质W分解较少。 (5)在该实验操作过程中应注意的事项是在温度较低的情况下操作,防火,控制处理的时间等。 答案 (1)晾干 高温烘干过程中,植物甲中的物质W易被破坏;新鲜的植物甲含水量高,用于提取的极性有机溶剂会被水稀释,进而降低对物质W的提取效果 (2)使原料和溶剂充分混匀 (3)去除提取液中的色素 (4)丙酮沸点低于乙醇,蒸馏时物质W分解较少 (5)在温度较低的情况下操作,防火 2.(2015·全国卷Ⅰ,T39)已知微生物A可以产生油脂,微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题: (1)显微观察时,微生物A菌体中的油脂通常可用于________染色。微生物A产生的油脂不易挥发,可选用____________(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。 (2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落,可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样,并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。 (3)若要测定培养液中微生物B的菌体数,可在显微镜下用________直接计数;若要测定其活菌数量,可选用________法进行计数。 (4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度,某同学测得相同时间内,在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg,则上述三个温度中,_______ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度,应围绕________℃设计后续实验。 解析 (1)油脂可被苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液染成橘黄色(或红色)。由于微生物A产生的油脂不易挥发,故采用萃取法。(2)脂肪酶的微生物B可以分解脂肪,故可以以脂肪为碳源的固体培养基进行培养,不产生脂肪酶的微生物无法生存。(3)微生物B的菌体数,可在显微镜下用血细胞计数板直接计数;活菌用稀释涂布平板法,只有活的菌体才能形成菌落。(4)45℃降解10g油脂所需酶量最大,故酶活性最小;40℃温度下,降解10g油脂所需酶量最小,故酶活性最大,由此可知要想探究该酶的最适温度需要围绕40℃温度设置温度梯度进行实验。 答案 (1)苏丹Ⅲ(或者苏丹Ⅳ) 萃取法 (2)油脂 (3)血细胞计数板 稀释涂布平板 (4)45 40 3.(2015·全国卷Ⅱ,T39)回答与胡萝卜有关的问题: (1)胡萝卜含有的胡萝卜素中,最主要的是_______(填“α—胡萝卜素”或“β—胡萝卜素”或“γ—胡萝卜素”),该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子_____________,后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症,该疾病称为________,胡萝卜素是_____________(填“挥发性”或“非挥发性”)物质。 (2)工业生产上,用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时,______(填“需要”或“不需要”)将新鲜的岩藻干燥。 (3)现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂,应选用其中的______作为胡萝卜素的萃取剂,不选用另外一种的理由是_____________________________________________。 解析 (1)胡萝卜中含有的主要是β—胡萝卜素,β—胡萝卜素可在人体内可转变成维生素A。夜盲症是由于维生素A缺乏导致。胡萝卜素没有挥发性。 (3)作为萃取胡萝卜素的萃取剂要有较高的沸点、能充分溶解胡萝卜素且与水不混溶。胡萝卜素虽可溶于乙醇,但乙醇是水溶性有机溶剂,萃取中能与水混溶而影响萃取效果,所以不能用乙醇做萃取剂。 答案 (1)β—胡萝卜素 维生素A 夜盲症 非挥发性 (2)需要 (3)乙酸乙酯 萃取胡萝卜素的有机溶剂应不与水混溶,而乙醇为水溶性有机溶剂 4.(新题速递)真核生物细胞内,大量DNA和蛋白质以及一些RNA等混杂在一起,难以分离。生物兴趣小组的同学为了获得纯度相对较高的DNA展开了实验探究。 (1)分离各种物质的基本思路是根据DNA和其他物质理化性质的不同而采取一定的方法,如图表示从各种物质间______________存在差异这一角度开展了研究: a.取鸡血细胞悬液10 mL,加蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒_________(填“缓慢”或“快速”)搅拌。过滤、取滤液,然后将滤液转移到塑料材质的大烧杯中。 b.沿大烧杯内壁持续、缓慢地加入饱和硫酸铵溶液,用玻璃棒沿一个方向________(填“缓慢”或“快速”)搅拌,同时不断收集析出的物质。根据图示鸡血中几种物质的析出情况分析: ①如果只收集纤维蛋白,可采取的措施是_____________________。 ②DNA在浓度约为 ______(填最小值)的硫酸铵溶液中溶解度最小,此浓度下与其同时析出的物质还有_____________________。 (2)如果要进一步去除其他杂质,尽可能提高获得的DNA纯度,可采取的两种办法有_____________________________________________________。 解析 (1)分析曲线图可知,不同物质在不同浓度的硫酸铵中析出的相对量有所差别,即分离各种物质的基本思路是根据DNA和其他物质之间溶解度的差异进行分离。 a.取鸡血细胞悬液10 mL,加蒸馏水20 mL,此时可以用玻璃棒快速搅拌,以加速血细胞的破裂; b.沿大烧杯内壁持续、缓慢地加入饱和硫酸铵溶液。为了防止将DNA的丝状物搅碎,此时应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌,同时不断收集析出的物质; ①从图中看出,纤维蛋白析出所需的硫酸铵浓度最低,硫酸铵浓度在20%之前已经开始析出,在浓度为30%时析出最多,另外,超过30%后球蛋白也将逐渐析出,因此如果只收集纤维蛋白,可以在硫酸铵浓度达到30%之前收集析出物。 ②从图中看出,DNA在浓度约为65%的硫酸铵溶液中析出量最大,此时溶解度最小,与此同时析出的物质还有球蛋白、纤维蛋白和少量的tRNA。 (2)如果要进一步去除其他杂质,尽可能提高DNA的纯度,可在溶有DNA与蛋白质的溶液中加入冷却的95%的酒精,由于DNA不溶于酒精,而其他杂质可溶于酒精,因此收集的析出物即为较高纯度的DNA;酶具有专一性,可以用嫩肉粉(木瓜蛋白酶)处理溶有DNA与蛋白质的溶液,此时蛋白质可以水解,因此可以分离DNA和蛋白质;又由于DNA和蛋白质对高温的耐受性不同,将溶有DNA与蛋白质的溶液放在60~75 ℃的恒温水浴箱中保温一段时间,可以去除蛋白质。 答案 (1)溶解度 a.快速 b.缓慢 ①在硫酸铵浓度达到30%之前收集析出物 ②65% 纤维蛋白、球蛋白和少量的tRNA (2)在溶有DNA与蛋白质的溶液中加入冷却的95%的酒精,收集析出物;用嫩肉粉(木瓜蛋白酶)处理溶有DNA与蛋白质的溶液;将溶有DNA与蛋白质的溶液放在60~75 ℃的恒温水浴箱中保温一段时间查看更多