【生物】2021届新高考一轮复习人教版专题23　微生物的培养与发酵工程作业

【生物】2021届新高考一轮复习人教版专题23　微生物的培养与发酵工程作业

第七单元　生物技术与工程 专题23　微生物的培养与发酵工程 考情探究 课标解读 考情分析 备考策略 考点 考向 ‎1‎ 微生物的培养技术及应用 培养基与微生物的纯化 获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础,发酵工程为人类提供多样的生物产品,本专题内容情境贴近生产生活实际,是高考的命题热点。已出现的高考试题中,考查内容集中在微生物的实验室培养、特定微生物数量的测定方法、培养基对微生物的选择作用等,试题多为非选择题,试题大都符合高起点、低落点的特点。从素养考查上,已出现的高考试题主要集中在科学探究中的发酵工程方案的探讨与结果预测分析方面 ‎(1)从类型、特点和应用等方面列表归纳并比较不同微生物培养基的类型及应用。‎ ‎(2)构建果酒、果醋与泡菜等的制作、特定微生物的分离纯化等过程模型,可以加深对知识的记忆与理解 微生物的分离与计数 ‎2‎ 传统发酵技术与发酵工程 传统发酵技术与发酵工程 真题探秘 基础篇 基础集训 考点一　微生物的培养技术及应用 考向1　培养基与微生物的纯化 ‎1.肺炎双球菌是人体鼻腔中常见的微生物,分为R型和S型。某同学欲用S型肺炎双球菌的化学成分和R型肺炎双球菌为材料,获得S型肺炎双球菌,进行如下实验。请回答下列问题:‎ ‎(1)在无菌环境中,将R型细菌接种到盛有S型细菌　　　　的培养液的培养瓶中,密闭培养或敞口培养,都能得到S型活菌,这说明肺炎双球菌的代谢类型是　　　　　　　。 ‎ ‎(2)要通过观察菌落来鉴定上述培养液中是否产生了S型肺炎双球菌,需要将上述菌液接种到　　　　　(填“固体”或“液体”)培养基上,为了得到单菌菌落,常采用的接种方法有两种,即　　　　　　　　和　　　　　　　　。 ‎ ‎(3)通常情况下,在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、　　　　　　　和　　　　　　　。无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行,以避免被周围环境中　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)DNA　异养兼性厌氧　(2)固体　平板划线法　稀释涂布平板法　(3)干热灭菌　高压蒸汽灭菌　微生物污染 ‎2.(2020届吉林长春一模,41)陈胸声是中国近代微生物工业的开拓者和奠基人,为我国的发酵工业做出了巨大贡献。分析他的成就,回答下列问题。‎ ‎(1)1922年,我国一家酒精生产厂用甜菜作原料,生产总是失败。陈胸声研究发现是因为原料中感染了一种酪酸菌。实验室中为避免杂菌污染需要利用　　　　　　　　(仪器),在压力和温度分别是　　　　　　条件下维持15~30 min,将原料灭菌。 ‎ ‎(2)我国传统生产酱油有将大豆等发酵产生小分子肽、氨基酸等的过程。1933年,陈胸声为解决酱油酿造菌种不纯的问题,从各个酱油作坊采集了上千种的样品,从中筛选了一种　　　　　酶活性很高的米曲霉。对菌种进行筛选并计数常用的方法是　　　　　　　。 ‎ ‎(3)1934年,陈胸声发现用甘蔗生产酒精时添加硫酸铵或尿素可以大幅度提高发酵速度,这是为微生物补充了　　　　　(营养物质)。 ‎ ‎(4)在上个世纪60年代,陈胸声用淀粉、玉米浆等作为原料,从上万的菌株中筛选出高产谷氨酸的黄色短杆菌,使我国味精生产达到国际先进水平。请写出筛选的思路   　。 ‎ 答案　(1)高压蒸汽灭菌锅　100 kPa、121 ℃(顺序错不对)　(2)蛋白　稀释涂布平板法　(3)氮源　(4)用淀粉、玉米浆等作为原料,分别接种菌株,发酵后,检测谷氨酸的生成量 考向2　微生物的分离与计数 ‎3.筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后,得到如图所示的两个菌落,培养平板经稀碘液处理,出现了以菌落为中心的透明圈。相关叙述不正确的是(　　)‎ A.培养基中的淀粉可为微生物提供碳源 B.两个菌落中的微生物为同一种微生物 C.两个菌落中的微生物均能将淀粉酶分泌至细胞外 D.透明圈直径与菌落直径的比值越大,说明该微生物分解淀粉的能力越大 答案　B ‎4.(2020届安徽蚌埠月考一,30)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:‎ ‎(1)培养微生物的培养基中的营养成分一般都有水、无机盐、　　　　　　　　等。此外,还需要满足微生物生长对pH、温度、　　　　　及特殊营养物质的需求。 ‎ ‎(2)培养基配制时需要进行灭菌,对培养基进行灭菌,采用的方法是　　　　　　　。灭菌后,随机取若干灭菌后的平板先行培养一段时间,这样做的目的是　　　　　　　　　。 ‎ ‎(3)该小组将1 mL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为42、38和43,据此可得出每毫升水样中的活菌数为　　　　　。这种接种方法叫　　　　　　　。 ‎ ‎(4)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌,接种操作时,全程要在　　　　　附近进行;在第二次及以后的划线中,总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)碳源、氮源　氧气　(2)高压蒸汽灭菌法　检测培养基灭菌是否合格　(3)4.1×104　稀释涂布平板法 ‎(4)酒精灯火焰　将聚集的菌体逐渐稀释以便获得单个菌落 考点二　传统发酵技术与发酵工程 考向　传统发酵技术与发酵工程 ‎1.(2020届天津一中模拟,34)发酵工程的第一个重要工作是选择优良的单一纯种。消灭杂菌、获得纯种的方法不包括(　　)‎ A.根据微生物遗传组成的差异,在培养基中加入不同比例的核酸 B.根据微生物缺乏生长因子的种类,在培养基中增减不同的生长因子 C.根据微生物对碳源需要的差别,使用含不同碳源的培养基 D.根据微生物对抗生素敏感性的差异,在培养基中加入不同的抗生素 答案　A ‎2.某校同学在实验室开展生物技术实践活动,请回答下列有关问题:‎ ‎(1)A组同学制作泡菜。在泡菜腌制的过程中,要注意控制腌制的时间、　　　　　和食盐的用量;最后要向坛盖边沿的水槽中注满水,这一操作的目的是　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)B组同学制作腐乳。在制作腐乳的过程中,在腐乳表面往往会有一层致密的皮,这层皮实际上是微生物的　　　　　　　,对人体无害;加盐的作用是　　　　　　　　　　　　　　　,避免豆腐块变质。 ‎ ‎(3)C组同学制作蓝莓果酒与果醋。某同学对自己的发酵装置定时通过充气口充气,该同学是在制蓝莓　　　　　。另一位同学在蓝莓果汁中直接加入某品牌活性酵母,之后先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气,通入无菌空气的目的是　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(4)在蓝莓果酒制作的过程中,在变酸的酒的表面观察到的菌膜是由　　　　　大量繁殖而形成的,其可在缺少糖源时将乙醇变为　　　　　,然后变为醋酸。 ‎ 答案　(1)温度　保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境　(2)匍匐菌丝　析出豆腐中的水分使其变硬、抑制微生物的生长　(3)果醋　在有氧条件下,使酵母菌迅速繁殖,数量增加　(4)醋酸菌　乙醛 ‎3.(2020届湖南长沙一中月考二,35)泡菜是我国的传统食品之一,但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”,查阅资料得到图:‎ ‎(1)为保证泡菜发酵过程中的无氧环境,在装坛发酵前后需要检查泡菜坛　　　　　　　　　,并对泡菜坛进行　　　　　处理,在腌制过程中,坛中会出现溶液量增多现象,主要原因是　。 ‎ ‎(2)测定亚硝酸盐含量的原理:对亚硝酸盐的测定可用　　　　　法,在盐酸酸化的条件下,亚硝酸盐进行重氮化反应后,再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成　　　　　色染料。 ‎ ‎(3)据图可知,腌菜时食盐的浓度越低,亚硝酸盐含量的峰值出现得越早,且峰值较高,原因是 ‎ ‎　。 ‎ 答案　(1)有无裂纹和砂眼　用水密封坛口　外界溶液浓度高,使蔬菜细胞渗透失水　(2)比色　玫瑰红　(3)食盐用量过低,造成微生物大量繁殖,将蔬菜中的硝酸盐还原成亚硝酸盐 应用篇 应用集训 应用　制作酸奶的微生物学原理 ‎1.关于酸奶制作,下列说法正确的是(　　)‎ A.含抗生素的牛奶更容易发酵 B.温度越高,制作酸奶需要的时间越长 C.牛奶变酸的同时,其中的糖类发生了变化 D.制作过程中需不断通入无菌空气 答案　C ‎2.酸奶不仅美味,还含有丰富的蛋白质、钙以及多种维生素等,酸奶制作也比较简单,所以广受人们的喜欢。请结合实际生活回答下列问题:‎ ‎(1)对奶牛养殖厂售岀的新鲜牛奶消毒常用　　　　　法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)某同学将超市买来的某品牌老酸奶加入鲜奶中,搅拌均匀后,放入酸奶机中,也可制作美味可口的酸奶,该同学加入适量老酸奶的目的是　　　　　　　　。 ‎ ‎(3)若要分离纯化得到发酵效果相对较好的乳酸菌种,所用的培养基中要加入碳酸钙(有CaCO3的培养基不透明,无CaCO3的培养基透明),其作用除中和产生的乳酸外,还可以　　　　　　　　,分离纯化时应挑选出　　　　　的菌落作为候选菌。 ‎ ‎(4)乳酸菌菌种若要长期保存,菌液中常需要加入一定量的　　　　　,并在-20 ℃的环境中存放。 ‎ 答案　(1)巴氏消毒　在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少　(2)接种　(3)鉴别乳酸菌　透明圈大　(4)甘油 ‎【五年高考】‎ 考点一　微生物的培养技术及应用 ‎1.(2019课标全国Ⅰ,37,15分)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解,会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。‎ Ⅰ号培养基:在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5 g/L)。‎ Ⅱ号培养基:氯化钠(5 g/L),硝酸铵(3 g/L),其他无机盐(适量),X(15 g/L)。‎ Ⅲ号培养基:氯化钠(5 g/L),硝酸铵(3 g/L),其他无机盐(适量),X(45 g/L)。‎ 回答下列问题。‎ ‎(1)在Ⅰ号培养基中,为微生物提供氮源的是　　　　　　　　。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是　　　　。 ‎ ‎(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中,培养一段时间后,不能降解X的细菌比例会　　　　,其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基,若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数,接种时,应采用的方法是　　　　　　　　。 ‎ ‎(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌,且该菌能将X代谢为丙酮酸,则在有氧条件下,丙酮酸可为该菌的生长提供　　　　　　　　　和　　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)牛肉膏、蛋白胨　X　(2)下降　不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖,而能降解X的细菌能够增殖 ‎(3)稀释涂布平板法　(4)能量　合成其他物质的原料 ‎2.(2019课标全国Ⅱ,37,15分)物质W是一种含氮有机物,会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。‎ ‎(1)要从土壤中分离目标菌,所用选择培养基中的氮源应该是　　　　。 ‎ ‎(2)在从土壤中分离目标菌的过程中,发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌,应该选择　　　　菌落进一步纯化,选择的依据是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源,请简要写出实验思路、预期结果和结论,即　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌,使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异,该小组拟进行如下实验,请完善相关内容。‎ ‎①在含有一定浓度W的固体培养基上,A处滴加含有酶E的缓冲液,B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液,C处滴加　　　　,三处滴加量相同。 ‎ ‎②一段时间后,测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈,说明　　　　　　　　　　　;若A、B处形成的透明圈直径大小相近,说明　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)W　(2)乙　乙菌落周围出现透明圈,说明乙菌能降解W　(3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上,若细菌能生长,则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源　(4)①缓冲液　②缓冲液不能降解W　酶E与天然酶降解W的能力相近 ‎3.(2019课标全国Ⅲ,37,15分)回答下列与细菌培养相关的问题。‎ ‎(1)在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是　　　　(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　。硝化细菌在没有碳源的培养基上　　　　(填“能够”或“不能”)生长,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)用平板培养细菌时一般需要将平板　　　　(填“倒置”或“正置”)。 ‎ ‎(3)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过　　　　处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。 ‎ 答案　(1)蛋白胨　不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同　能够　硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源　(2)倒置　(3)在一定的培养条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征　(4)灭菌 ‎4.(2018课标全国Ⅰ,37,15分)将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。‎ 回答下列问题:‎ ‎(1)M培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制　　　的生长,加入了链霉素的培养基属于　　　　培养基。 ‎ ‎(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有　　　　　　(答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有　　　　　　　　(答出两点即可)。 ‎ ‎(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是　　　,该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是　 ‎ ‎　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:‎ 甲同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是110、140和149,取平均值133;‎ 乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。‎ 有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是 ‎ ‎　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)细菌　选择　(2)碳源、无机盐　蛋白质、核酸 ‎(3)碘液　淀粉遇碘液显蓝色,产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解,形成透明圈　(4)乙同学的结果中,1个平板的计数结果与另2个相差悬殊,结果的重复性差 ‎5.(2018课标全国Ⅱ,37,15分)在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。‎ 回答下列问题:‎ ‎(1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具　　　　(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。 ‎ ‎(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能　　　　　　　　　。在照射前,适量喷洒　　　　　　,可强化消毒效果。 ‎ ‎(4)水厂供应的自来水通常是经过　　　　(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。 ‎ ‎(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)可以　(2)在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少　(3)破坏DNA结构　消毒液　(4)氯气　(5)未将锅内冷空气排尽 ‎ ‎6.(2018课标全国Ⅲ,37,15分)回答下列与酵母菌有关的问题:‎ ‎(1)分离培养酵母菌通常使用　　　　　　　(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”)培养基,该培养基应采用　　　　　　灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上,培养一段时间后可观察到菌落,菌落的含义是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)酵母菌液体培养时,若通入氧气,可促进　　　　　　　(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”);若进行厌氧培养,可促进　　　　　　(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)。 ‎ ‎(3)制作面包时,为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松软的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)麦芽汁琼脂　高压蒸汽　由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体　(2)菌体快速增殖　乙醇产生　(3)酵母菌分解葡萄糖会产生CO2,CO2使面包松软 ‎7.(2018江苏单科,31,8分)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半,可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养,这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母,并进行大量培养。下图所示为操作流程,请回答下列问题:‎ ‎(1)配制培养基时,按照培养基配方准确称量各组分,将其溶解、定容后,调节培养基的　　　　,及时对培养基进行分装,并进行　　　　　　　　灭菌。 ‎ ‎(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中,在步骤③中将温度约　　　　(在25 ℃、50 ℃或80 ℃中选择)的培养基倒入培养皿混匀,冷凝后倒置培养。 ‎ ‎(3)挑取分离平板中长出的单菌落,按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有　　　　　　　。 ‎ a.为保证无菌操作,接种针、接种环使用前都必须灭菌 b.划线时应避免划破培养基表面,以免不能形成正常菌落 c.挑取菌落时,应挑取多个菌落,分别测定酵母细胞中甲醇的含量 d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度,获得甲醇高耐受株 ‎(4)步骤⑤中,为使酵母数量迅速增加,培养过程中需保证充足的营养和　　　　供应。为监测酵母的活细胞密度,将发酵液稀释1 000 倍后,经等体积台盼蓝染液染色,用25×16型血细胞计数板计数5 个中格中的细胞数,理论上　　　　色细胞的个数应不少于　　　　,才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。 ‎ 答案　(1)pH　高压蒸汽(湿热)　(2)50 ℃　(3)a、b、d　(4)氧气　无　30‎ ‎8.(2017课标全国Ⅰ,37,15分)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用。回答下列问题:‎ ‎(1)有些细菌能分解尿素,有些细菌则不能,原因是前者能产生　　　。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。但可用葡萄糖作为碳源,进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(答出两点即可)。 ‎ ‎(2)为了筛选可分解尿素的细菌,在配制培养基时,应选择　　　(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作为氮源,不选择其他两组的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。‎ ‎(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作用有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(答出两点即可)。 ‎ 答案　(1)脲酶　分解尿素的细菌是异养生物,不能利用CO2来合成有机物　为细胞生命活动提供能量,为其他有机物的合成提供原料　(2)尿素　其他两组都含有NH4NO3,能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3,不能起到筛选作用　(3)为细菌生长提供无机营养,作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定 ‎9.(2017江苏单科,31,7分)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中,对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤,从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:‎ ‎(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作为碳源的有　　　　　　　。 ‎ ‎(2)将采集到的样品接种培养,苯酚用量应随转接次数增加而逐渐　　　　,以达到富集酚降解菌的目的。若如图平板中菌落过于密集,应进一步　　　　　　,以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外,还必须添加　　　　。 ‎ ‎(3)如图为连续划线法示意图,在图中　　　　(填图中序号)区域更易获得单菌落。 ‎ ‎(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应,下表中1~5号比色管的苯酚浓度应分别为　　　　　　　　。 ‎ 管号 ‎1‎ ‎2‎ ‎3‎ ‎4‎ ‎5‎ ‎6‎ 苯酚浓度(mg/L)‎ ‎1‎ 如果废水为50 mg/L苯酚溶液,降解后约有21%的苯酚残留,则需将残留液稀释　　　　(填序号:①5　②10　③20)倍后,再进行比色。 ‎ 答案　(7分)(1)蛋白胨、苯酚　(2)增加　稀释涂布　凝固剂　(3)③　(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8　③‎ ‎10.(2016课标全国Ⅰ,39,15分)空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下:‎ ‎①配制培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);‎ ‎②制作无菌平板;‎ ‎③设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作;‎ ‎④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。‎ 回答下列问题:‎ ‎(1)该培养基中微生物所需的氮来源于　　　　　　　。若要完成步骤②,该培养基中的成分X通常是　　　　。 ‎ ‎(2)步骤③中,实验组的操作是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了　　　　现象。若将30(即36-6)个/平板作为本组菌落数的平均值,该做法　　　　(填“正确”或“不正确”)。 ‎ 答案　(1)牛肉膏、蛋白胨　琼脂　(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上,开盖暴露一段时间　(3)污染　不正确 ‎11.(2016课标全国Ⅲ,39,15分)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题:‎ ‎(1)分离纯化乳酸菌时,首先需要用　　　　对泡菜滤液进行梯度稀释,进行梯度稀释的理由是　 ‎ ‎　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有　　　　　　　　　　　　和　　　　　　　　。分离纯化时应挑选出　　　　　　　　　　　　的菌落作为候选菌。 ‎ ‎(3)乳酸菌在-20 ℃长期保存时,菌液中常需要加入一定量的　　　　(填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”)。 ‎ 答案　(1)无菌水(2分)　泡菜滤液中菌的浓度高,直接培养很难分离得到单菌落(3分)　(2)鉴别乳酸菌　中和产生的乳酸(或酸)(每空3分,共6分)　具有透明圈(2分)　(3)甘油(2分)‎ ‎12.(2015课标全国Ⅰ,39,15分)已知微生物A可以产生油脂,微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题:‎ ‎(1)显微观察时,微生物A菌体中的油脂通常可用　　　　染色。微生物A产生的油脂不易挥发,可选用　　　　(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。 ‎ ‎(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落,可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样,并应选用以　　　　为碳源的固体培养基进行培养。 ‎ ‎(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数,可在显微镜下用　　　　　直接计数;若要测定其活菌数量,可选用　　　　　　法进行计数。 ‎ ‎(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度,某同学测得相同时间内,在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg,则上述三个温度中,　　　　℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度,应围绕　　　　℃设计后续实验。 ‎ 答案　(1)苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)　萃取法(每空2分,共4分)‎ ‎(2)油脂(3分)　(3)血细胞计数板　稀释涂布平板(每空2分,共4分)　(4)45　40(每空2分,共4分)‎ 考点二　传统发酵技术与发酵工程 ‎13.(2017课标全国Ⅱ,37,15分)豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素,某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀,再将两者置于适宜条件下进行发酵,并在32 h内定期取样观测发酵效果。回答下列问题:‎ ‎(1)该实验的自变量是　　　　　　、　　　　　　。 ‎ ‎(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好,说明该发酵菌是　　　　　。 ‎ ‎(3)如果在实验后,发现32 h内的发酵效果越来越好,且随发酵时间呈直线上升关系,则无法确定发酵的最佳时间;若要确定最佳发酵时间,还需要做的事情是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(4)从大豆到豆豉,大豆中的成分会发生一定的变化,其中,蛋白质转变为　　　　　　　,脂肪转变为　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)菌种　发酵时间　(2)好氧菌　(3)延长发酵时间,观测发酵效果,最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间　(4)氨基酸和肽　脂肪酸和甘油 ‎14.(2016课标全国Ⅱ,39,15分)苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的。回答下列问题:‎ ‎(1)酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段,在酵母菌细胞的　　　　　　　中进行,其产物乙醇与　　　　试剂反应呈现灰绿色,这一反应可用于乙醇的检验;过程③在酵母菌细胞的　　　　中进行。与无氧条件相比,在有氧条件下,酵母菌的增殖速度　　　　。 ‎ ‎(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程,根据醋酸杆菌的呼吸作用类型,该过程需要在　　　　条件下才能完成。 ‎ ‎(3)在生产过程中,第一阶段和第二阶段的发酵温度不同,第一阶段的温度　　　　(填“低于”或“高于”)第二阶段的。 ‎ ‎(4)醋酸杆菌属于　　　　核生物,其细胞结构中　　　　(填“含有”或“不含有”)线粒体。 ‎ 答案　(1)细胞质基质　重铬酸钾　线粒体　快　(2)有氧　(3)低于　(4)原　不含有 ‎15.(2016天津理综,10,12分)天津独流老醋历史悠久、独具风味,其生产工艺流程如下图。‎ 淀粉类 原料成熟 酒醅成熟 醋醅 ‎(1)在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度,这是因为酶　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)在酒精发酵阶段,需添加酵母菌。在操作过程中,发酵罐先通气,后密闭。通气能提高　　　　的数量,有利于密闭时获得更多的酒精产物。 ‎ ‎(3)在醋酸发酵阶段,独流老醋采用独特的分层固体发酵法,发酵30天。工艺如下。‎ ‎①发酵过程中,定期取样测定醋酸杆菌密度变化,趋势如图。据图分析,与颠倒前相比,B层醋酸杆菌在颠倒后密度变化的特点是　　　　　　　　　　　　　,由此推测,影响醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是　　　　　　　　　　。 ‎ ‎②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中,发酵缸中　　　　　　　　　　　　　　　　　　层的醋醅有利于乳酸菌繁殖,积累乳酸。 ‎ ‎③成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少,主要原因是发酵后期营养物质消耗等环境因素的改变,加剧了不同种类乳酸菌的　　　　,淘汰了部分乳酸菌种类。 ‎ 答案　(12分)(1)在最适温度条件下催化能力最强　(2)酵母菌　(3)①先快速增长后趋于稳定　氧气、营养物质、pH　②颠倒前的B层和颠倒后的A(或不翻动,或下)　③种间竞争(或竞争)‎ ‎16.(2015广东理综,29,16分)泡菜是我国的传统食品之一,但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”,查阅资料得到图。‎ ‎(1)制作泡菜时,泡菜坛一般用水密封,目的是　　　　　　　。乳酸菌发酵第一阶段的产物有　　　　　　　。 ‎ ‎(2)据图,与第3天相比,第8天后的泡菜更适于食用,因为后者　　　　　　　　　　;pH呈下降趋势,原因是　。 ‎ ‎(3)该小组得到一株“优选”乳酸菌(亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍),拟参照资料的实验方案和食盐浓度(4%~10%),探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低,并确定其最适条件。请你设计一个实验结果记录表,并推测实验结论。‎ 答案　(16分)(1)创造无氧环境(1分)　丙酮酸、[H]、ATP(3分)‎ ‎(2)亚硝酸盐含量已接近最低水平(1分)　乳酸积累(2分)‎ ‎(3)结果记录表(6分)‎ 亚硝酸盐含量(单位:mg/kg)‎ 食盐浓 度(%)‎ 乳酸菌 发酵时间(d)‎ ‎1‎ ‎2‎ ‎3‎ ‎4‎ ‎5‎ ‎6‎ ‎7‎ ‎8‎ ‎9‎ ‎10‎ ‎4‎ 普通 优选 ‎7‎ 普通 优选 ‎10‎ 普通 优选 注:其他合理答案酌情给分。‎ 推测实验结论:‎ ‎①用“优选”乳酸菌制作泡菜,亚硝酸盐含量更低(1分)‎ ‎②最适条件是亚硝酸盐含量最低时的食盐浓度和发酵时间(2分)‎ 教师专用题组 ‎1.(2014课标Ⅰ,39,15分)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题:‎ ‎(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成的复合酶,其中的葡萄糖苷酶可将　　　　分解成　　　　。 ‎ ‎(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时,CR可与纤维素形成　　　　色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的　　　　。 ‎ ‎(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表):‎ 酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR溶液 水 培养基甲 ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎-‎ ‎+‎ ‎+‎ 培养基乙 ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎-‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ 注:“+”表示有,“-”表示无。‎ 据表判断,培养基甲　　　　(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　;培养基乙　　　　(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是　  　。 ‎ 答案　(1)纤维二糖　葡萄糖　(2)红　透明圈　(3)不能　液体培养基不能用于分离单菌落　不能　培养基中没有纤维素,不会形成CR—纤维素红色复合物,即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌 ‎2.(2014课标Ⅱ,39,15分)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:‎ ‎(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是　; ‎ 然后,将1 mL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为　　　　。 ‎ ‎(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时,接种环通过　　　　灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是　 。 ‎ ‎(3)示意图A和B中,　　　　表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 ‎ ‎(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养。结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中　　　的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高　　　　　　的利用率。 ‎ 答案　(15分)(1)检测培养基平板灭菌是否合格　3.8×107(每空2分,共4分)　(2)灼烧(2分)　将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3分)　(3)B(2分)　(4)溶解氧　营养物质(每空2分,共4分)‎ ‎3.(2013课标Ⅱ,39,15分)临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。‎ 回答下列问题:‎ ‎(1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用　　　　法或　　　　法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。 ‎ ‎(2)取该单菌落适当稀释,用　　　　法接种于固体培养基表面,在37 ℃培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板。 ‎ ‎(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A　　　　;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B　　　　;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说明　 ; ‎ 含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素D的　　　　。 ‎ ‎(4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素　　　　。 ‎ 答案　(15分)(1)划线　稀释涂布(或涂布)(每空2分,共4分)　(2)涂布(1分)　(3)敏感　不敏感　该致病菌对C的敏感性比对A的弱　耐药菌(每空2分,共8分)　(4)A(2分)‎ ‎【三年模拟】‎ 时间:40分钟　分值:100分 一、单项选择题(每小题5分,共30分)‎ ‎1.(2020届天津一中模拟,24)在“果醋制作过程”中,获得较多的醋酸(杆)菌菌种的最简便方法是(　　)‎ A.从变酸的葡萄酒表面获得菌膜,再培养、分离 B.不必人为加入菌种,在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸(杆)菌 C.从泡菜坛盖边沿的水槽表面获得菌膜,再培养、分离 D.从土壤中分离提取 答案　A ‎2.(2020届甘肃武威十八中一诊,6)如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤,下列相关叙述正确的是(　　)‎ A.步骤①倒平板操作时,倒好后应立即将其倒过来放置 B.步骤②将接种环在火焰上灼烧后迅速沾取菌液进行平板划线 C.步骤③通过连续划线,使接种物逐渐稀释,培养后出现单个菌落 D.步骤④培养箱培养后可用来对X细菌进行计数 答案　C ‎3.(2020届山东师大附中月考一,25)下列有关微生物分离、纯化及计数的叙述中,错误的是(　　)‎ A.用富含纤维素的培养基富集培养纤维素分解菌 B.平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散并计数 C.稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散 D.用血细胞计数板计数微生物时,实验结果往往偏大 答案　B ‎4.(2020届浙江之江教育评价联盟二联,15)如图是探究果酒与果醋发酵的装置示意图,下列有关叙述错误的是(　　)‎ A.进行果酒发酵时,需密封气体入口 B.进行果酒发酵时,培养基装量需预留约1/3空间 C.进行果醋发酵时,最好在气体入口处塞脱脂棉球 D.进行果醋发酵时,加入的酒—水混合物需调pH至8.0‎ 答案　D ‎5.(2020届山东青岛期初调研,10)“葡萄美酒夜光杯,欲饮琵琶马上催”这句唐诗中提及了葡萄酒,人类用不同原料酿酒的历史已约5 000年,勤劳的人民在日常生活中总结了制作泡菜、果醋、果酒、腐乳等发酵食品的方法,下列说法错误的是(　　)‎ A.泡菜制作的发酵过程需要保证无氧的环境 B.当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将糖分解成醋酸 C.参与果酒发酵和参与果醋发酵的微生物都可以进行有氧呼吸 D.将长满毛的豆腐装瓶腌制时,底层和近瓶口处需加大用盐量 答案　D ‎6.(2020届甘肃武威十八中一诊,1)下列关于“发酵食品加工的基本方法”的叙述中,错误的是(　　)‎ A.含水量大于85%的豆腐利于保持湿度,适宜制作腐乳 B.果酒制作过程中,若发酵条件控制不当果酒可能变酸 C.腐乳制作过程中,适量加盐以防止豆腐变软、变质 D.果醋制作过程中,应连续充入无菌空气以利于醋酸发酵 答案　A 二、不定项选择题(每小题6分,共12分)‎ ‎7.(2020届山东等级考模拟,13)在实验室中可利用酵母菌发酵的方式制作葡萄酒,下列说法正确的是(　　)‎ A.葡萄糖在酵母菌细胞的线粒体内被分解 B.制作葡萄酒时酵母菌先在有氧条件下大量增殖 C.制作过程中酵母菌始终处于碱性环境 D.酵母菌的发酵产物不会抑制自身的代谢活动 答案　B ‎8.(2020届山东等级考模拟,20)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类,研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板,然后在平板上划分数区,将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域,培养结果如图所示。下列说法正确的是　(　　)‎ A.倒成平板后直接培养可判断有无污染 B.倒成平板后需要进行灭菌处理 C.图示结果表明该菌需要生长因子为乙或丙 D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选 答案　AD 三、非选择题(共58分)‎ ‎9.(2020届河北承德一中月考一,29)牛奶是日常生活中经常食用的乳制品,对人体健康有很大好处。环保科技兴趣小组从某牛奶厂排污口获取水样,希望从中筛选出能高效降解蛋白质的细菌。据有关知识回答下列问题。(9分)‎ ‎(1)对牛奶进行消毒常用的方法是　　　　　　　,其优点是　　　　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)为实现筛选目的,该兴趣小组使用了如下配方的培养液。‎ 蛋白质、K2HPO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、CaCl2、‎ NaCl、MgSO4·7H2O、加水定容 在配制培养液时　　　　　(填“能”或“不能”)将该配方中的蛋白质换成葡萄糖,原因是　 ‎ ‎　。 ‎ ‎(3)为实现目的菌株的分离和计数,应在该配方中加入　　　　　制成平板,常用的接种方法是　　　　　　　。为检测所使用的平板灭菌是否彻底或是否被污染,操作方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 ‎ 答案　(1)巴氏消毒法　既能杀死牛奶中的微生物,又不会破坏牛奶的营养成分　(2)不能　要筛选出能高效降解蛋白质的细菌,配制培养液时必须以蛋白质作为唯一碳源和氮源,所以不能把蛋白质换成葡萄糖　(3)琼脂　稀释涂布平板法　选择未接种的平板在适宜条件下放置一段时间,观察培养基上是否有菌落产生 ‎10.(2020届湖北天门、仙桃、潜江联考,34)(10分)联苯(C12H10)是一种难以降解的环境污染物,研究发现联苯降解菌内的联苯水解酶是催化联苯降解的关键酶。为了从富含联苯的环境中分离出联苯降解菌,某同学设计了甲、乙两种培养基,成分如下表:‎ 维生素 NH4NO3‎ MgCl2‎ 联苯 水 琼脂 培养基甲 ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ 培养基乙 ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎+‎ ‎-‎ ‎(注:“+”表示添加该物质,“-”表示没有添加该物质)‎ ‎(1)甲培养基中加入联苯作为　　　　　用于培养联苯降解菌,该培养基属于　　　　　(填“选择”或“鉴定”)培养基,接种前需采用　　　　　　　法进行灭菌。 ‎ ‎(2)为了便于测定培养基乙中联苯降解菌的数量,可以从培养基乙中取培养液1 mL加入　　　　　　　中稀释100倍之后进行显微计数,由此计算得到的培养基乙中联苯降解菌的数量是　　　　　(填“真实值”或“估算值”)。 ‎ ‎(3)关于图示接种方法的叙述,正确的是　　　　　。 ‎ A.接种环正在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌 B.接种后的平板需倒置培养 C.该接种方法可得到单个菌落 D.酒精灯提供了局部无菌环境 答案　(1)碳源　选择　高压蒸汽灭菌　(2)99 mL无菌水　估算值　(3)BCD(全对才得分)‎ ‎11.(2020届辽宁铁路实验中学开学考,39)(10分)泡菜是人们广泛喜爱的一种菜肴,但在制作过程中,会产生一定量的亚硝酸盐,亚硝酸盐与胺类结合成亚硝胺后具有致癌作用。请回答下列与泡菜制作有关的问题:‎ ‎(1)制作泡菜时,为了缩短制作时间,有人会加入少量陈泡菜液,加入陈泡菜液的目的是　　　　　　　　　　。 ‎ ‎(2)泡菜风味的形成关键在于　　　　　的加入。泡菜制作方法不当,很容易造成泡菜变质,甚至发霉变味,可能的原因有　  　。(写出两条) ‎ ‎(3)膳食中的亚硝酸盐一般　　　　　(填“会”与“不会”)危害人体健康,其含量测定时,需将显色反应后的样品与已知浓度的　　　　　进行目测比较,估算出亚硝酸盐含量。 ‎ ‎(4)若从泡菜液中分离纯化乳酸菌,所用固体培养基因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙,从而使培养基在分离纯化过程中会形成　　　　　。若要长期保存乳酸菌,菌液中需要加入一定量的　　　　,且要放置在　　　　　℃的冷冻箱中。 ‎ 答案　(1)陈泡菜液含乳酸菌,为泡菜发酵提供菌种　(2)调味料(香辛料)　泡菜坛密封不严、工具不卫生、食盐用量过低、温度过高、腌制时间过短　(3)不会　标准显色液　(4)透明圈　甘油　-20‎ ‎12.(2020届河北唐山摸底,13)(10分)在日常生活中,人们非常重视食品安全问题。当食品中的大肠杆菌数目超过某一限定值之后会对人体造成严重危害。因此,大肠杆菌被列为重要的微生物检测指标。以下是能够检测大肠杆菌数量的三种方法。回答下列问题:‎ ‎(1)平板计数法:培养大肠杆菌通常使用　　　　　(填“LB”或“MS”或“查氏”)培养基,其成分有酵母膏、蛋白胨、NaCl、H2O、X,其中为大肠杆菌提供氮源的是　　　　　　　　,X代表　　　　　。该方法所统计样品中含菌数的结果往往偏低的原因是　  　。 ‎ ‎(2)滤膜法:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在　　　　　培养基上培养。在该培养基上,大肠杆菌的菌落呈现　　　　　色。 ‎ ‎(3)多管发酵法:原理是根据大肠杆菌能发酵乳糖产酸产气的特征,检测水样中大肠杆菌的方法。该方法使用的是乳糖蛋白胨培养液,其乳糖可为大肠杆菌提供　　　　　和　　　　　。 ‎ 答案　(1)LB　酵母膏、蛋白胨　琼脂　当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落　(2)伊红美蓝　黑　(3)碳源　能量 ‎13.(2020届河北廊坊二联,54)(9分)啤酒酵母是啤酒生产的重要原料菌,决定着啤酒的风味和质量,某实验小组从原浆啤酒底泥中分离出一株高活性的啤酒酵母。请回答下列问题:‎ ‎(1)在对原浆啤酒泥的酵母菌进行富集培养的过程中,每隔4 h要摇动一次,每次1~2 min,其目的是  　。 ‎ ‎(2)为了制备啤酒酵母分离培养基,实验人员将马铃薯去皮切块后高压煮沸,过滤后补加蒸馏水至1 L,加入葡萄糖和琼脂后加热熔化;将马铃薯高压煮沸的主要目的是　　　　　　　　　　,该培养基的碳源包括　　　　　　　　,用于装培养基的培养皿一般用　　　　　法进行灭菌处理。 ‎ 答案　(1)增大溶氧量,并使酵母菌充分利用营养物质,促进酵母菌的有氧呼吸和增殖　(2)灭菌,以防杂菌污染　淀粉和葡萄糖等　干热灭菌 ‎14.(2020届湖北武汉起点监测,35)(10分)金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物,可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时,可破坏菌落周围的红细胞,使其褪色。如图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程,请回答相关问题:‎ ‎(1)按细胞结构分类,金黄色葡萄球菌属于　　　　　生物;从培养过程分析,振荡培养的目的是　  　。 ‎ ‎(2)7.5%NaCl肉汤培养基可为微生物提供的营养成分包括水、　　　　　　　　,这种培养基从功能上看属于　　　　　　　。 ‎ ‎(3)实验结束后,使用过的培养基应　　　　　处理,以避免污染环境或感染操作者。 ‎ ‎(4)经多次规范操作、重复实验,血平板上的菌落周围出现　　　　　,初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌,但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带,因此,要对本操作进行完善,完善的方案是　  　。 ‎ 答案　(1)原核　使微生物与营养物质充分接触并提高培养液中的氧气含量　(2)无机盐、碳源、氮源　选择培养基　(3)灭菌　(4)透明圈　设置加灭菌的鲜牛奶但其他操作均相同的对照组