高中生物22动物细胞工程导学案新人教版选修3

高中生物22动物细胞工程导学案新人教版选修3

真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 1 2.2.1 动物细胞工程----动物细胞培养和核移植技术 【学习目标】1、简述动物的细胞培养过程、条件及其应用。 2、简述体细胞克隆动物概念、过程和原理，了解应用前景，关注克隆技术安全性和伦理性 问题。 【学习重点】动物的细胞培养过程、条件及其应用 【学习难点】动物细胞的培养过程 【知识梳理】 一、动物细胞工程 动物细胞工程技术手段_______________、______________、_______________、______________等技术。 _____________________是动物细胞工程的基础。基础：________________技术。 二、动物细胞的培养 1 概念.动物细胞培养是从动物体中取出相关的 ，将它分散成 ，然后放在适 宜的 中，让这些细胞 。 2.遵循的原理： 3.流程：取动物 （动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用 处理分散成 →制成 →转入培养瓶中 进行 培养→贴满 瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续 培养。 〖思考〗 (1)、动物细胞与组织培养为什么选用动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织？ (2)、组织取出后用胰蛋白酶处理目的是什么？为什么用胰蛋白酶处理可达到此目的？能否用胃蛋白酶代 替？培养过程中为什么要定期用胰蛋白酶处理？动物组织培养需要胰蛋白酶处理吗？ 4.条件：① ：培养液和培养用具应进行 处理。通常还要在培养液中添加一定量的 ， 以防培养过程中的 污染。此外，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 ② ：合成培养基中通常需加入 等成分。 ③ ：哺乳动物多是 度 ；pH： 。 ④ ：95% ＋5% ；其中，O2 是细胞代谢必需的，CO2 的作用是 。 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 2 【例题 1】一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件……………………………（ ） ①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆 ④温度与动物体温相近 ⑤需要 02，不需要 C02 ⑥能调培养液 pH A．①②③④⑤⑥ B．①②③④ C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥ 4.应用：①生物制品：如病毒疫苗、 、 抗体的生产。 ②检测有毒物质，判断某种物质的毒性。（思考：苏丹红有致癌作用吗？请简要描述实验过程） ③用于 、 、 等方面的研究，如是筛选抗癌药物等。 ④应用于基因工程：____________是基因工程技术中常用的受体细胞，因此，离不开动物细胞培养。 5 比较、列表比较植物组织培养和动物细胞培养（原理、培养基、结果、培养目的） 【例题 2】动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于…………………………（ ） A．所用培养方法不同 B．动物细胞培养不需要在无菌的条件下进行 C．动物细胞培养需要用胰蛋白酶把组织消化形成单个细胞 D．动物细胞可传代培养，植物细胞不能 【例题 3】下列对动物细胞培养的有关叙述正确的是…………………………………（ ） A、动物细胞培养目的是获得大量分泌蛋白 B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散 C、细胞癌变发生于原代培养向传代培养的过程中 D、培养至 50 代后传代细胞称为细胞株 三 、动物细胞核移植（理论基础：动物的细胞核具有________） 1.概念：将动物细胞的 ，移入已 ，使其重组 并发育为一个 ，且最 终发育为 。 种类： 哺乳动物核移植可以分为 核移植（比较容易）和 核移植 （比较难）。 2.进行细胞核移植是采集去核卵(母)细胞，在体外培养到 时期。 3.过程 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 3 思考题： １、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？ ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代 10 代以内的细胞，为什么？ 3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了 100%的复制吗？为什么？ 4.应用： (1)在畜牧生产中：可以加速家畜遗传改良进程，促进________________。 (2)在保护濒危物种方面：可增加这些动物的____________。 (3)在医药卫生领域：转基因克隆动物可以作为_____________生产珍贵的医用蛋白。 (4)在治疗人类疾病方面：转基因克隆动物细胞、组织和器官可以作为____________的供体。 (5)人的核移植胚胎干细胞经诱导分化，形成相应的组织、器官后，可以用于________________。 (6)研究胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的________________和____________。 5．存在问题：(1)__________低。(2)绝大多数克隆动物还存在__________。(3)克隆动物食品的 ____________存在争议。 【例题 4】一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊 的 子 宫 内 发 育 ， 结 果 产 下 一 只 羊 羔 。 这 种 克 隆 技 术 具 有 多 种 用 途 ， 但 是 不 能…………………………………………………………………………………………（ ） A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的 基因型 知识点一 动物细胞培养 1．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是 ( ) A．培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞 B．克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 C．二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 D．恶性细胞系的细胞可进行传代培养 2．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是 ( ) A．都需要用 CO2 培养箱 B．都需要用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞 的全能性 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 4 知识点二 动物体细胞核移植技术和克隆动物 3．一只羊的卵母细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵母细胞经过多次分裂，再植入第三 只羊的子宫内发育，结果产下了一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能( ) A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优 秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物 的基因型 4．如图为某哺乳动物的生殖过程图，正确的叙述是( ) A．个体 2 为克隆动物，c 为高度分化的体细胞 B．个体 2 的遗传性状与提供 b 细胞的母羊完全不同 C．产生动物个体 2 的生殖方式为有性生殖 D．e 细胞为完成减数分裂的卵细胞 【基础巩固】 1、用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是 （ ） A．都需用CO2培养箱 B．都须用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞全能性 2、在将动物组织块分散成单个细胞时，可以使用胰蛋白酶。由此可以推测 （ ） A．胰蛋白酶一定不会对动物细胞造成损伤 B．处理时一定要注意处理时间、加酶量 C．动物细胞培养液pH应与胰蛋白酶作用的适宜pH基本一致 D．动物细胞之间可能依靠蛋白质联系 3、在动物细胞培养过程中，使用胰蛋白酶的目的是 ( ) A．使动物组织分散为单个细胞 B．去掉细胞壁，使其成为原生质体 C．去掉细胞膜，暴露出原生质体便于细胞融合 D．促进蛋白质水解为多肽 4．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件 ( ) ①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆 ④温度与动物的体温相近 ⑤需要氧气，也需要二氧化碳 ⑥适宜的 pH A．①②③④⑤⑥ B．①②③④ C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥ 5．下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是 ( ) A．培养基成分不同 B．动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C．动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D．动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株 6．从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚 胎，再移入到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊大多数性状 ( ) A．难以预测 B．像甲 C．像乙 D．像丙 7．根据培养基的物理性质划分，植物组织培养和动物细胞培养所常用的培养基分别是( ) A．固体培养基、固体培养基 B．固体培养基、液体培养基 C．液体培养基、固体培养基 D．液体培养 基、液体培养基 8．进行动物细胞培养时，最好选用的培养材料是 ( ) A．衰老退化的动物组织细胞 B．成熟动物个体的体 细胞 C．动物的受精卵细胞 D．健康动物胚胎或幼 龄动物个体的体细胞 能力提升 9．下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 ( ) A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 B．原代培养的细胞一般传至 10 代左右便会出现生长停止 C．动物细胞培养一般能够传到 40～50 代，但其遗传物质发生了改变 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 5 D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身的健康细胞 10．美国杜克大学医疗中心一个研究小组在《科学》杂志上撰文透露，他们利用成年猪的动脉血管细胞和 能够模拟胚胎环境的新型生物效应器，成功地在实验室培育出新的动脉血管。这种血管的外形和功能都与 真的血管一样。这一研究成果是生物组织培养工程领域的重大进展。下列关于以上技术的叙述中，不正确 的是( ) A．以上技术属于“克隆” B．这项技术中可能利用了去核卵细胞 C．这项技术的关键是要激发血管细胞的“全能性” D．这项技术的关键是要激发血管细胞发育成 血管的潜能 11．2010 年 6 月中国养殖网报道，“内蒙古白绒山羊种羊场”诞生了目前国际上规模最大的一批转基因 克隆绒山羊。关于克隆，除个体水平的外，还有分子、细胞、器官等水平的克隆，下列不属于克隆技术的 是 ( ) A．从出生不久的小鼠心脏取下细胞在体外离体培养成细胞系 B．使某些特定的外源基因在哺乳动物体 内表达 C．农业生产上利用马铃薯的芽繁殖马铃薯 D．将 单个 B 淋巴细胞进行无性繁殖 12、①在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面 时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 。此时， 瓶壁上形成细胞层数是 。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需 要用 酶。②随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞停 止分裂，进而出现 的细胞，但极少数细胞可以连续增殖，其中 有些细胞会因遗传物质发生改变而变成 细胞，该种细胞黏着 性 ，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 。 ③现用某种大分子染料对细胞进行染色，观察到死细胞被染色，而活 细胞不染色，原因是 。检查某种毒物是否 能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到 期的细 胞用显微镜进行观察。 ④细胞培养中，通常在 条件下保存细胞，在这种条件下，细胞中 活性降低，细胞 的 速率降低。 ⑤患者移植培养皮肤组织发生排斥反应，这是因为机体把移植皮肤组织当作 而进行攻击。 13、现有 A 和 B 两个肉牛品种，A 品种牛的细胞组成可表示为 A 细胞核、A 细胞质，B 品种牛则为 B 细胞 核、B 细胞质。 ①如果要获得一头克隆牛，使其细胞由 A 细胞核和 B 细胞质组成，基本步骤从 A 品种牛取出体细胞，进行 培养，再从培养细胞中取出 注入 B 品种牛 卵母细胞，经过刺激和培养后，可形成胚胎， 该胚胎称为 。将该胚胎移入代孕母牛 中，通过培育可达到目的。 ②克隆牛的产生说明 具有全能性。克隆牛的性状主要表现 品种牛的特征。由 A、 B 两品种杂交得到的牛与克隆牛相比，杂交牛细胞核的遗传物质来自_____个亲本，细胞质来自 性 亲本，克隆牛和杂交牛的遗传物质组成_____（相同，不同）。 14.人的血清蛋白在临床上需求量很大，通常从血液中提取。由于艾滋病等人类传染病造成的威胁与日俱 增，使人们对血液制品心存疑虑。生物技术的发展与应用使利用动物生产人的血清蛋白成为可能，如图是 上海某研究所培育生产出血清蛋白奶牛的流程图。根据图示回答： (1)雌性奶牛胚胎干细胞是 ( ) A．雌性奶牛产生的卵细胞 B．雌性奶牛体内的受精卵 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 6 C．能发育成雌性奶牛的受精卵 D．从奶牛胚胎中取出的细胞，这个奶牛胚胎将发育成雌性奶牛 (2)图中 A、B 用到的生物技术分别为____________、____________。 (3)小牛 1、2、3 的性别是________性，性状________(填“相同”或“不相同”)。 (4) 在 形 成 重 组 细 胞 之 前 ， 先 去 掉 受 体 牛 卵 母 细 胞 的 核 ， 其 原 因 是 ___________________________________________________________________。 (5)举例说明体细胞核移植在治疗人类疾病方面的应用。 _________________________________________________________________ ___________________________________________________________________。 15、某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞 有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题： (1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后， 观察到甲细胞数量比乙细胞数量________。 (2) 在 动 物 细 胞 培 养 时 ， 通 常 在 合 成 培 养 基 中 加 入 适 量 血 清 ， 其 原 因 是 ________________________________________________________________________ 。 细 胞 培 养 应 在 含 5%CO2 的恒温培养箱中进行，CO2 的作用是________________。 (3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长________。药物试验需要大量细胞，两种细胞 频繁传代 ，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更________。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用 ____________消化处理。 (4)为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的________。 (5)已知癌基因 X 过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物 Y 对甲细胞生长的影响，可 将甲细胞分为 A、B 两组，A 组细胞培养液中加入一定量的__________，B 组细胞培养液中加入等量的无菌 生理盐水，经培养后，从 A、B 两组收集等量细胞，通过分别检测 X 基因在 A、B 两组细胞中的______或 ________合成水平的差异，确定抗肿瘤药物 Y 的药效。 综合拓展 16．随着科学技术的发展，人们可以根据人类的需求来改造生物的性状，在许多领域取得了可 喜的成果，下图是利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的图解，根据下图回答： (1) 此 工 程 涉 及 的 现 代 生 物 技 术 主 要 有 ： _____________________________________________________________。 (2) 在 形 成 图 中 ③ 的 过 程 中 ， 我 们 称 ② 为 ______________ ， 获 取 ② 的 途 径 主 要 有 ____________________________ 。 能 实 现 ② 直 接 进 入 ③ 吗 ？ ________________ 。 为 什 么 ？ ______________________________________________________________________________。 (3)图中①一般经________ 处理可以得到③，从③到④的过程中一般用未受精的卵细胞去核为受体， 不 用 普 通 的 体 细 胞 ， 原 因 是 ： ____________________________________________ _。 (4)⑦ 是 ⑥ 的 后 代 ， 那 么 ⑦ 与 ⑥ 的 遗 传 性 状 完 全 一 样 吗 ？ ____________ ， 为 什 么 ？ ___________________________________________________________________________________________ ______________。利用转基因动物乳汁生产生物产品的方法称为______________，利用核移植的方法得到 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 7 的动物叫做__________。 17、让羊产牛奶，科学家对此做了相关的构想，过程如图所示。请据图回答有关问题： (1) 图 中 涉 及 的 现 代 生 物 技 术 有 ______________________________________(至少写三种)。 (2)小羊 a、小羊 b、小羊 c 的性状表现_____________ (填“相 同 ” 或 “ 不 同 ” ) ， 你 的 理 由 是 __________________________________________________ 。 小 羊 a 与 羊 N 呢 ? _______ ， 理 由 是 ________________ ______________________________________ _______。 (3)若研究发现羊 N 细胞中线粒体发达，故而它的产奶率高，则 小 羊 a 会 有 这 一 优 良 性 状 吗 ? _______ ， 你 的 依 据 是 __________________________________________________________ _。 (4)有人设想将羊体细胞与牛体细胞进行融合，以获得新物种“羊一牛”，你认为依据目前的生物 技 术 和 理 论 能 否 实 现 这 一 构 思 ? __________ ， 你 的 理 由 是 _________________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________ ______。 2.2.2 动物细胞工程----动物细胞融合和单克隆抗体 【学习目标】1. 列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同 2. 举例说出动物细胞融合与单克隆抗 体的原理和应用。 【学习重点】1.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义。 2.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的 步骤和应用 【学习难点】单克隆抗体的制备过程。 一 、动物细胞融合 1.概念 动物细胞融合也称 ，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合 后形成的具有原来 细胞遗传信息的单核细胞，称为 。 2.原理: 3.过程 动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融 合的方法类似，常用的诱导因素有 、 、 等。 不同 DNA 的两个或多个细胞 ――→ 灭活的病毒 PEG，电激 ______细胞。 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 8 4 意义：细胞融合技术突破了______________ 方法的局限，使____________ 成为可 能。 二、单克隆抗体 1．传统获得抗体 (1)方法：①向动物体内反复注射某种________，使动物产生______；②从动物______ 中分 离所需抗体。 (2) 特 点： 、 、 。 2．单克隆抗体的制备 （1）原理： （2）选材： （理由： ） （理由： ） (2)过程 给小鼠注射特 定的抗原蛋白―→从 中分离 B 淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞―→骨髓瘤细胞 ――――→ 灭活病毒 融合 多 种 融 合 细 胞 ――――→ 选择培养基 筛选 ____________――――――→ 克隆化培养和 抗体检测 ―→ 小鼠体内培养 体外培养 ―→________抗体 (2)杂交瘤细胞的特点：____________，产生____________。 (3)单克隆抗体的优点：________ ，____________ ，产量大。 3．单克隆抗体的应用 (1)作为诊断试剂，具有准确、_____ _、简易、_____ _的优点。 (2)用于___________ 和____________ 。 知识点一 动物细胞融合 1．阅读下列材料： 材料一 由于细胞的密度不同，在地面上受重力影响，细胞的融合非常困难，在太空进行此实验比在地面 实验的细胞融合率要高很多。“神舟”六号飞船上进行了 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合、黄花烟草原生 质体和“革新”一号烟草原生质体的融合两个科学实验，在电融合仪内经过 160 min 后，终于获得成功。 材料二 如图为哺乳动物生殖过程及相关细胞工程的示意图，其中 b 为卵细胞，c、d 为体细胞。 根据以上材料回答： (1)细胞融合技术与传统的有性杂交相比，其优越性在于_______________ _。在太空 进行细胞融合与在地面进行细胞融合相比，其优越性在于__________________________________。 (2)动物个体甲、乙的产生分别属于哪种生殖？__________________________________。 (3)在“神舟”六号飞船上进行的“太空融合”，与上图中的方法_______ _的原理相同。 (4)人工诱导动物细胞融合与诱导植物细胞融合的方法相同的是都可 用物理法和化学法，此外动物细胞融合还可用________________作为 诱导剂。 知识点二 单克隆抗体 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 9 2．某实验室做了下图所示的实验研究，下列相关叙述，正确的是 ( ) A．与纤维母细胞相比，过程①形成的诱导干细胞的全能性较低 B．过程②是诱导干细胞的结构和遗传物质发生稳定性差异的过程 C．每个 Y 细胞只产生一种抗体，故过程③不需用选择性培养基进行筛选 D．过程④产生的单抗，不需细胞膜上载体蛋白的协助就能释放到细胞外 3．近年来，我国死于狂犬病的人数有上升趋势。狂犬病病毒的核酸是 RNA，机体感染病毒后产生的特异 性 IgG 抗体，能消除狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异性抗体的重要依据。我国利 用地鼠的肾细胞培养狂犬病疫苗，已取得良好效果。 请根据上述材料，回答下列问题。 (1)巴斯德利用固定毒株制成减毒活疫苗，预防狂犬病，制成减毒活疫苗需要用________ 培养。 (2)特异性抗体获取可用单克隆抗体制备。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程技术是 _________________________________________________ _____________________________________。 (3)下面是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答： ①图中 A 过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是 ____________细胞，该细胞能够产生________。从小鼠体 内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是 ____________。 ②图中 B 过程是细胞融合，该过程需要用灭活的________________、聚乙二醇或电激等诱导。 ③特异性抗体获取的方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中 分离所需抗体。与这种方法制备的抗体相比，单克隆抗体具有________________________________等优点。 (4) 动 物 细 胞 体 外 培 养 需 要 满 足 的 环 境 条 件 有 ____________________________________ 。 (5) 单 克 隆 抗 体 的 制 备 还 有 哪 些 用 途 ？ __________________________________________ 。 基础落实 1．科学家用灭活的病毒把骨髓瘤细胞与效应 B 细胞融 合，得到杂交瘤细胞，则灭活病毒的作用是 ( ) A．病毒比较小，可钻入到细胞内 B．灭活的病毒 已完全死亡，死亡的病毒可以让细胞聚集 C．灭活的病毒已失去感染活性，对各种动物细胞不造 成破坏，但所保留的融合活性，可以使不同的动物细胞进行融合 D．灭活的病毒带有目的基因，通过整合可以让杂合细胞带有目的基因 2．单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述， 错误的是( ) A．特异性强、灵敏度高 B．与抗癌药物结合可制成“生物导弹” C．体外培养 B 淋巴细胞可大量制备单克隆抗体 D．由效应 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤 细胞分泌 3．近几年神舟飞船频频成功发射和着陆。在飞船上，科学家进行了无人搭载的空间动物细胞融合实验。 该实验所依据的原理和促进细胞融合的方法分别是 ( ) A．细胞的全能性、灭活病毒诱导融合 C．生物膜的流动性、灭活病毒诱导融合 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 10 D．生物膜的流动性、电刺激融合 B．细胞的全能性、电刺激融合 4．由单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”。下 列对此叙述不正确的( ) A．“瞄准装置”是指识别肿瘤的单克隆抗体 B．“弹头”是由化学药物构成的 C．“弹头”具有特异性 D．“瞄准装置”具有特异性 5．将小鼠骨髓瘤细胞与一种 B 淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，下列关于此项技 术的依据、步骤及应用的叙述不正确的是 ( ) A．B 淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖 B．骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体 C．B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞直接放入培养液中就能融合为杂交瘤细胞 D．单克隆抗体可用于疾病的诊断、治疗和预防，也可用于研制治疗癌症的“生物导弹” 能力提升 6．新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术(或仪器)与应用匹配正确的是(多选) ( ) A．PCR 技术——扩增蛋白质 B．杂交瘤技术——制备单克隆抗体 C．光学显微镜——观察叶绿体的基粒 D．花粉离体培养——培育单倍体植物 7．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是 ( ) A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的 B 淋巴细胞 B．用氯化钙作诱导剂，促使能产生抗体的 B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 C．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体 D．该杂交瘤细胞株的增殖方式和产物分别是有丝分裂和单克隆抗体 8．下列关于生物技术的有关说法，正确的是 ( ) A．细胞具有全能性的原因是体细胞具有使后代细胞形成完整个体的能力 B．杂交瘤细胞的主要特点是既能在体外大量增殖，同时又能分泌特异性抗体 C．在基因操作的基本步骤中，目的基因的检测和鉴定不进行碱基互补配对 D．灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物的细胞 9、如图所示为细胞融合技术的一些过程，据图回答： (1)从 A 和 B 细胞到 C 细胞的过程中，必须用________处理。 (2) 若 A 、 B 细 胞 为 植 物 细 胞 ， 那 么 这 样 的 细 胞 已 经 用 酶 降 解 脱 掉 了 细 胞 壁 ， 这 种 酶 可 能 是 ________________，由此生成的 A 和 B 细胞称为________。由 A、B 到 C 的过程中，常用的物理方法有 ________。融合完成的标志是________，形成 D 细胞还要应用________技术，把其培养成植株。 (3)若 A 为人细胞，B 为鼠细胞，并分别用红、绿荧光染料标记细胞上的蛋白质，在 C 细胞阶段，细胞一 半发红色荧光，一半发绿色荧光，到 D 细胞阶级，两种颜色的荧光 均 匀 分 布 ， 原 因 是 ____________________ ______________________________________ 。 (4)若 A、B 细胞为动物细胞，一般取自________________，然后用 ____________将其分散开。由 A、B 到 C 的过程中，采用的不同于植 物细胞融合的手段是______________________________________________________________。 10.下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请据图回答下列问题： 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 11 (1)请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体 制备过程的顺序连接起来。 ________________________________________________________________________。 (2)在单克隆抗体制备过程中，之所以选用 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具 有_____________、___________ _的特性。 (3)由图示可看出，单克隆抗体的制备过程运用了___________ _和__________ 等动物细胞工程 技术手段。 11、已知细胞合成 DNA 有 D 和 S 两条途径，其中 D 途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种 DNA 的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有 S 途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在 试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞，请回答： (1)试管中除融合的杂种细胞外，还有________种融合细胞。 (2)设计一种方法(不考虑机械方法)，从培养液中分离出杂种细胞，并说明原理。 方 法 ： _______________________________________________________________ 。 原理：_____________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________________ ______________。 12．有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交 要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融 合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简 略过程，请据图回答相关问题。 (1)若 a、b 分别是基因型为 Hhrr、hhRr 两个烟草品种的花粉， 且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性纯合基 因(rr 或 hh)的作用，在光照强度大于 800 lx 时都不能生长。要 想 从 融 合 细 胞 的 培 养 液 中 分 离 出 基 因 型 为 HhRr 的 杂 种 细 胞 ， 较 为 简 便 的 筛 选 方 法 是 ___________________________________________________________________________________________ ______________。 (2)若 a、b 表示两种植物体细胞，则采用化学法形成 c 时，一般是用______________作为诱导剂。由 d 细胞形成杂种植株的原理是__________________，这种育种方法的优点是__________________________。 (3)若 a、b 分别为骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞，则 d 细胞的特点是______________________。由 d 细胞产生 的抗体与普通血清抗体相比较，具有______________________的特点。生产一般不能通过直接培养 B 淋巴 细 胞 的 方 法 生 产 单 克 隆 抗 体 的 主 要 原 因 是 ________________________________________________________________________。 综合拓展 13．下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 12 ① 技术是单克隆抗体技术的基础。 ②根据培养基的用途分类，图中 HAT 培养基属于 培养基。 ③单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是 。 ④动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用 。 ⑤ 选 出 的 杂 交 瘤 细 胞 既 具 备 骨 髓 瘤 细 胞 的 特 点 ， 又 具 备 淋 巴 细 胞 的 特点。 ⑥淋巴细胞是由动物体 中的 细胞分化、发育而来。 ⑦杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要 方式是 。 14、人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用 疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为 RNA 病毒， 该病毒表面的 A 蛋白为主要抗原，其疫苗生产和单克 隆抗体制备的流程之一如下图： 请回答： (1)过程①代表的是________。 (2)过程②构建 A 基因表达载体时，必须使用________________和________两种工具酶。 (3)过程③采用的实验技术是____________，获得的 X 是__________。 (4)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的________所制备的疫苗。对该传染病 疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行__ __________比较；或用图中的 ________________进行特异性结合检测。 15、右图为细胞融合的简略过程，请据图回答： （1）若 A、B 是植物细胞，在细胞融合之前已用____ __________ ____________处理，除去了____________；由 A、B 到细胞 C 的过程中，常用的物理方法是_____________________________。 融合完成的标志是_______________ 。 （2）若 A、B 是植物细胞，则形成的 D 细胞还要应用__________ ____________________技术把 D 培养成植株。 （3）若 A、B 是动物细胞，一般取自________________________________， 然后用 使其分散开来；由 A、B 到 C 的过程中，常用的不同于植物细胞融合的手段 是 ， 所 形 成 的 D 称 为 ， A 、 B 融 合 为 C 的 过 程 说 明 了 细 胞 膜 具 有 。 （4）若该过程是制备单克隆抗体，A 为小鼠效应 B 细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已经被注射 了 。注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应，生成了___________________________________， 图中 B 为 。 （5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在 A、B 到 C 的过程中，所形成的 C 有_____种，用来培养的 D 细胞 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 13 应该是_________________。从中选择出它的方法是_________________培养，获得 D 后，常用的培养方法 是培养液中培养和_____________________ _________________。 （6）若 A 为人细胞，B 为鼠细胞，并分别用红、绿荧光染料标记细胞膜上的蛋白质，在 C 细胞时，细胞 一半发红色荧光，一半发绿色荧光。到 D 细胞阶段，两种颜色的荧光均匀分布，请解释原因。 ______________________________________。 2.2.1 动物细胞工程----动物细胞培养和核移植技术【答 案】 对点训练 1．D [动物细胞在培养过程中有接触抑制现象，细胞在培养瓶中会贴壁生长，形成一层细胞，相互接触 后停止生长。克隆培养法培养过程中，仅有极少数细胞的基因型会发生改变。二倍体细胞的传代培养一般 传至 10 代后就不易传下去了。恶性细胞系的细胞具有不死性，可以进行传代培养。] 知识链接 动物细胞培养注意事项 (1)动物细胞培养时，一般选取幼龄动物的组织、器官，其细胞的分化程度较低，增殖能力强，有丝分裂 旺盛，容易培养。 (2)在动物细胞培养过程中，一般情况下 10 代以前的细胞核型不变，10 代以后有些细胞核型发生改变， 50 代以后的细胞可能发生癌变。 (3)胰蛋白酶在动物细胞培养过程中的作用包括将组织分散成单个细胞，以及将贴壁细胞从瓶壁上分离下 来，这样做的目的是避免动物细胞的接触抑制现象。 2．C [不管是动物细胞培养还是植物组织培养，最基本的一个外界条件就是都要在无菌环境条件下进行。 此外，动物细胞培养的培养基是液体培养基，其中的碳源是葡萄糖，培养液中还需要加入一定的动物血清， 其气体环境是 95%空气＋5%的二氧化碳，以维持培养液的 pH。而植物组织培养的培养基为固体培养基，其 碳源为蔗糖，在组织培养的脱分化阶段必须在黑暗条件下进行，再分化过程则需 要一定的光照条件；动 物细胞培养就是细胞的增殖，不能体现细胞的全能性，而植物组织培养体现了植物细胞的全能性。] 3.D [生物的各种性状是由遗传物质——DNA 控制的。由细胞核内的 DNA 控制的遗传叫细胞核遗传，由细 胞质内 DNA(主要存在于线粒体、叶绿体)控制的遗传叫细胞质遗传。目前的克隆技术是将一个体细胞核移 入一个去核的卵母细胞，经过试管培养一段时间后，再移入另一个体的子宫内发育、分娩的技术，通过该 技术能够保持亲本的优良性状，能够保持性别不变，亦能够用于保存物种，但不能改变动物的基因型，这 是因为基因型的改变是通过动物的有性生殖(减数分裂)完成的。] 知识链接 动物细胞核移植和克隆动物 4．A [通过克隆技术培育的动物称为克隆动物，提供细胞核的是高度分化的体细胞，A 项正确；B 项考虑 细胞质基因，应该是“有相同之处”；动物的克隆实际上是无性生殖过程，C 项错误；e 细胞是处于减数 第二次分裂中期的卵母细胞，并没有完全完成减数分裂，D 项错误。] 归纳提升 动物细胞核移植的条件及结果 (1)核移植一般选择去核的卵母细胞，因为卵母细胞体积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质 和营养条件。一般不选择生殖细胞作为供核细胞，因为生殖细胞与正常体细胞相比，遗传物质减半。 (2)核移植时，一般先用电刺激使供受体细胞融合，再用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成细胞分 裂和发育进程。 (3)核移植过程中细胞核只来自于一个个体，因此核遗传物质与供核个体的相同，属于无性繁殖，不会改 变生物体的基因型。 (4)克隆动物的性状与核供体生物的性状基本相同，但不是完全相同，因为： ①克隆动物的细胞质遗传物质来自于受体卵母细胞。 ②生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的 影响。 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 14 【巩固练习】1.C 2.D 3．A [在进行动物细胞培养前，先用胰蛋白酶使组织块中的细胞相互分散开， 以增加与培养液的接触面积，便于培养。] 4．A [动物细胞培养一般需要无菌、无毒的环境；一定的营养；一般与动物相近的体温和适宜的 pH 以及 气体环境等。] 5．A [动物细胞培养和植物组织培养的不同点主要有：①原理不同：植物组织培养的原理是细胞的全能 性；而动物细胞培养的原理则是有丝分裂；②培养基不同：植物组织培养的培养基为固体培养基，动物细 胞培养的培养基为液体培养基，除营养物质外还有血清、血浆等；③结果不同：植物组织培养最终培养为 完整的植株，而动物细胞培养最后形成细胞株或细胞系。] 6．B [由于出生的小羊的细胞核中的遗传物质和提供细胞核的甲羊相同，所以小羊大多数性状像甲。但 由于乙提供了细胞质，细胞质中线粒体 DNA 也会发挥作用，所以小羊的性状不会和甲羊完全一样。] 7．B [在植物组织培养过程中所用的是固体培养基，而在动物细胞培养过程中需制成单个悬浮细胞，用 的是液体培养基。] 8．D [在进行动物细胞培养时，用的是健康幼龄动物细胞或胚胎，这类细胞有旺盛的分裂能力。] 9．C [动物细胞培养到 40～50 代时的细胞叫做细胞株，其遗传物质没有发生改变。在之后的培养中，有 部分细胞的遗传物质发生了改变，并带有癌变性质，有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细 胞称为细胞系。] 10．C [“全能 性”是指细胞发育成完整生物体的潜能。上述技术并未产生出完整的个体，只是产生了 外形和功能都与真的血管一样的动脉血管。所以这项技术的关键并非要激发血管细胞的“全能性”，而是 要激发血管细胞发育成血管的潜能。] 11．B [克隆实质上就是一种无性繁殖，题中 A、D 两项都是细胞水平的克隆，C 项是指植物的营养生殖， 也属于克隆的范畴。B 项使某些特定的外源基因在哺乳动物体内表达，这属于转基因技术。] 12.⑴相互接触 接触抑制 单层（或一层） 胰蛋白酶 ⑵衰老甚至死亡 不死性 降 低 减少 ⑶由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的 膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色） ⑷中 ⑸冷冻（或超低温、液氮） 酶 新陈代谢 ⑹抗原 14．(1)D (2)基因工程(转基因技术) 动物细胞核移植 (3)雌 相同 (4)卵母细胞中的核物质会对转 基因重组细胞产生干扰 (5)为器官移植提供供体；研究疾病的发展进程和治疗疾病等 解析 (1)胚胎干细胞是来自于发育的胚胎，它可以形成一个个体。(2)图中 A 的操作对象是基因，而 B 过程中是一个细胞核与另一个细胞的细胞质重组。(3)图中小牛 1、2、3 细胞核中的遗传物质均来自雌性 母牛胚胎，所以都为雌性，而且大部分性状相同。(4)受体卵母细胞核中含有大量遗传物质，会对移入的 转基因重组细胞形成干扰，所以要去除。(5)克隆技术是一项新的技术，操作时有一定困难，但在器官移 植中器官的提供方面有较大前景。 15、(1)多 (2)血清可以补充合成培养基中缺乏的物质 维持培养液 pH (3)停止 多 胰蛋白酶 (4) 抗生素 (5)药物 Y 溶液 mRNA 蛋白质 16．(1)基因工程技术、核移植技术、胚胎移植技术 (2)目的基因 从基因文库获取、PCR 技术扩增、人 工合成 不能 独立的外源基因很难与受体细胞的基因连接和独立表达 (3)胰蛋白酶 卵细胞体积大易 操作，且其细胞质中含有促进细胞核表现出全能性的物质 (4)不一样 因为个体⑦的遗传信息几乎全部 来自供体的细胞核，没有孕育它的母体⑥的遗传信息 乳腺生物反应器 克隆动物 解析 目的基因的获取方法有从基因文 库中获取、人工合成及通过 PCR 技术扩增。获取的目的基因不能 直接导入受体细胞，需借助于载体，因为独立外源基因很难与受体细胞的基因连接和独立表达。将动物细 胞分成单个需用胰蛋白酶处理，在细胞工程中细胞核导入的受体细胞常是去核的卵细胞，因为分化程度越 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 15 低，细胞全能性的表达越容易。克隆得到的动物，性状绝大多数像提供细胞核的动物。 17、⑴基因工程、核移植、胚胎移植、动物细胞培养（任选三种）⑵相同；这些个体都是由同一个重组细 胞发育形成的；不完全相同；小羊 a 细胞质中的遗传物质来自 O，生物体部分性状属于细胞质遗传⑶不会； 线粒体中的基因一般通过细胞质传递给后代，小羊 a 的细胞质主要来自于羊 O⑷不能；因为高度分化的动 物体细胞的全能性受到限制，由羊体细胞和牛体细胞融合得到的杂交细胞不能正常发育成完整个体，即使 得到一个个体也不能成为一个新物种，因为它不能正常生殖（具有开放性，其他合理答案也可以） 2.2.2 动物细胞工程----动物细胞融合和单克隆抗体 对点训练 1．(1)克服了远缘杂交不亲和的障碍 解决了因两种细胞密度不同而难以融合的问题 (2)有性生殖；无 性生殖 (3)三 (4)灭活的病毒 解析 (1)细胞融合与精卵结合相比，通过人工的方法克服了存在于物种之间的遗传屏障的困难，从而能 够按照人们的主观意愿，把来自不同物种的不同组织类型的细胞融合起来，克服了远缘杂交不亲和的障碍。 若在太空中进行细胞融合，可以解决因两种细胞密度不同而难以融合的问题。(2)动物个体甲是通过精卵 结合产生的，属于有性生殖，而乙是通过体细胞核移植技术产生的，属于无性生殖。(3)“太空融合”是 细胞融合，与方法三的原理相同，都是细胞膜的流动性。(4)动物细胞融合，除了可以利用诱导植物原生 质体融合的方法外，还可以采用灭活的病毒。 2．D [诱导干细胞的全能性比纤维母细胞高；诱导分化过程中遗传物质未发生改变，只是基因的选择性 表达；Y 细胞有很多种，故需用选择培养基进行筛选。单抗的分泌应通过胞吐方式，不需载体协助但消耗 能量。] 知识链接 (1)单克隆抗体的制备原理 3．(1)活细胞 (2)动物细胞融合技术和动物细胞培养技术 (3)①免疫的 B 淋巴 抗体 抗原(或狂犬病 病毒) ②病毒(或仙台病毒) ③特异性强、灵敏度高，并可以大量制备 (4)无菌、无毒、适宜温度和 pH、充足的气体、营养物质 (5)作为诊断试剂、运载药物(或“生物导弹”)等 归纳提升 1.制备单克隆抗体的关键思路及操作依据 (1)关键思路 ①克隆单一的 B 淋巴细胞，形成细胞群； ②将 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞。 (2)用 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因 ①每一个 B 淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体；不同种类的 B 淋巴细胞分泌的抗体不同； ②B 淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖；骨髓瘤细胞能够无限增殖。 2．单克隆抗体制备过程中的筛选及原因 (1)第一次筛选是在 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之后，因为有三种融合情况：B 淋巴细胞与 B 淋巴细胞 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 16 融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，而只有 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞的 融合细胞才是需要的杂种细胞。 (2)第二次筛选需先在多孔培养皿上培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选 出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是由单个杂交瘤细胞克隆来的，所以产生的抗体一定是化学 性质单一、特异性强的单克 隆抗体。 课后作业 1．C [动物细胞融合常用灭活的病毒作诱导剂，是因为灭活的病毒不再具有感染活性，不会对细胞造成 破坏，但仍可穿透细胞膜，促使不同的动物细胞融合。] 2．C [抗体是由 B 淋巴细胞分泌的，每一种淋巴细胞只能分泌一种抗体。要想获得大量单一抗体，需要 将某一种淋巴细胞大量克隆，但是在体外培养的条件下，B 淋巴细胞不能无限增殖。由效应 B 淋巴细胞与 骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞，能在体外培养的条件下大量增殖，并分泌单克隆抗体。单克隆抗体与 常规抗体相比，特异性强、灵敏度高，与抗癌药物结合可制成“生物导弹”，直接作用于癌细胞。] 3．C [不管是动物细胞融合，还是原生质体融合，都是利用了生物膜具有流动性这一原理。动物细胞融 合时最常用的诱导手段就是利用灭活的病毒诱导。] 4．C [单克隆抗体具有特异性识别肿瘤细胞等的作用，可以作为确定目标的“瞄准装置”。而“弹头” 是由具有杀伤力的药物构成的，但它不具有特异性识别肿瘤细胞的功能。] 5．C [杂交瘤细胞需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇的诱导才能融合。] 6．BD [PCR 技术应用于 DNA 的扩增，A 选项错误；叶绿体的基粒属于细胞的亚显微结构，只有通过电子 显微镜才能观察到，C 选项错误；单克隆抗体的制备是通过已免疫的 B 细胞与骨髓瘤细胞杂交后实现的， 属于杂交瘤技术，B 选项正确；培育单倍体植物常采用花粉离体培养技术，D 选项正确。] 7．B [B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合需要灭活的病毒、聚乙二醇或物理因素来诱导，氯化钙不能作 为诱导剂。氯化钙的作用是在基因工程中用于扩大细胞壁的通透性，便于重组质粒进入微生物的细胞内。] 8．B [基因的表达、转录和翻译都有碱基的互补配对。灭菌指杀死一定环境中的所有微生物的细胞、芽 孢和孢子。] 9、(1)诱导因素 (2)纤维素酶和果胶酶 原生质体 电激、振动 产生细胞壁 植物组织培养 (3)构成 细胞膜的蛋白质和磷脂分子具有一定的流动性 (4)动物胚胎或出生不久的幼龄动物的组织或器官 胰蛋 白酶 用灭活的病毒诱导细胞融合 解析 此题是对植物体细胞杂交、动物细胞融合，以及细胞膜的特点等比较全面的考查。植物体细胞杂交 前需先去掉细胞壁，因为细胞壁由纤维素和果胶组成，应用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。第二步就是让 不同的原生质体融合，融合必须采用一定的技术手段，进行人工诱导。在完成细胞融合后，不要将杂种细 胞培育成植株。最后考查了细胞膜的特性，细胞膜中的磷脂分子和蛋白质分子大都是可以运动的，即具有 一定的流动性。 10．(1) (2)无限增殖 产生特异性抗体 (3)动物细胞融合 动物细胞培养 解析 首先把小鼠骨髓瘤细胞与经特定抗原免疫过的小鼠 B 细胞进行融合获得杂交瘤细胞，然后筛选出能 产生特异性抗体的杂交瘤细胞，最后分别在体外或体内培养杂交瘤细胞，即可获得单克隆抗体。 11．(1)2 (2)培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨 髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可利用淋巴细 胞中的 S 途径合成 DNA 而增殖 12．(1)在大于 800 lx 的光照下培养 (2)聚乙二醇(PEG) 细胞全能性 克服不同生物远缘杂交不亲和 的障碍 真正的价值并不在人生的舞台上,而在我们扮演的角色中。 17 (3)既能无限繁殖，又能产生特定的抗体 特异性强、灵敏度高、化学性质单一 B 淋巴细胞高度分化， 不能无限增殖 解析 若 a、b 表示两种植物体细胞，则采用化学法形成 C 时，一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。由 d 细胞形成杂种植株的原理是细胞全能性，这种育种方法的优点是克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍。 13、①动物细胞融合 ②选择 ③灵敏度高、特异性强 ④灭活病毒 ⑤无限增殖 能产生特异性抗体 ⑥骨髓 造血干细胞 ⑦主动运输 14．(1)逆(反)转录 (2)限制性核酸内切酶(限制酶) DNA 连接酶(两空可以互换) (3)细胞融合 杂交 瘤细胞 (4) A 蛋白 核酸(基因)序列 抗 A 蛋白的单克隆抗体 15、⑴纤维素酶和果胶酶 细胞壁 电激、离心、振动 产生新的细胞壁 ⑵植物组织培养 ⑶ 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的组织或器官 胰蛋白酶 灭活的病毒 杂交细胞 一定的流动 性 ⑷ 抗原 效应 B 细胞、记忆细胞、抗体 骨髓瘤细胞 ⑸ 3 杂交瘤细胞 用特定选择培养 基 小鼠腹腔内增殖 （6）细胞膜上的蛋白质是可以移动的。